Análisis genético de PerA (BfpT), el regulador transcripcional de los operones bfp y per en Escherichia coli enteropatogena
Date
2003
Authors
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Publisher
Benemérita Universidad Autónoma de Puebla
Abstract
En Escherichia coli enteropatógena la producción del pilus BFP es dependiente del regulador PerA (BfpT), un activador transcripcional de la familia AraC/XylS. PerA es una proteína de 274 aminoácidos cuyo extremo carboxilo (trecho de 99 aminoácidos), contiene dos dominios a-hélice-vuelta-a-hélice (HTH) similares a los dominios de unión a DNA de algunas proteínas reguladoras.
En este estudio se generaron mutantes de PerA (BfpT) en aminoácidos del dominio HTH-2 y fueron analizadas en su capacidad para activar la expresión de fusiones transcripcionales y de unión a DNA. Dos de las mutaciones fueron dirigidas a los residuos Tirosina 255 y Prolina 259 (mutantes PerA-Y255A y PerA-P259A), las cuales afectaron drásticamente la capacidad de PerA de activar la expresión de las fusiones transcripcionales bfpA-cat y perA-cat. Adicionalmente, se obtuvo la mutante PerA-K260Ocre en la cual se introdujo un codón de paro en la posición 260 y una doble mutante con cambios en los residuos Lisina 249 y Tirosina 255. En ambos casos se observó un efecto similar a las mutantes anteriores, remarcando la importancia de estos aminoácidos en la capacidad de PerA de activar a los promotores Ppert y Pbfpt. Posteriormente, las proteínas mutantes PerA-Y255A y PerA-P259A fueron purificadas como proteínas de fusión a MBP y utilizadas en experimentos de interacción proteína-DNA. Nuestros datos indican que el dominio HTH-2 está involucrado en el reconocimiento y la unión a las secuencias reguladoras de los genes blanco, lo cual es concordante con lo determinado para otras proteínas de la misma familia.