Romero Aguilar, LuceroMorales Lara, LauraROMERO AGUILAR, LUCERO; 349302MORALES LARA, LAURA; 95428Martínez Acosta, Rodrigo2025-05-262025-05-262025-02https://hdl.handle.net/20.500.12371/28417"En este estudio se optimizó la expresión y caracterización cinética de las enzimas recombinantes piruvato quinasa (PK) y fosfofructocinasa-1 (PFK-1) de Ustilago maydis mediante el uso del vector pET-28a y distintas cepas de Escherichia coli como sistema de expresión. Se evaluaron variables como temperatura, tiempo de inducción y concentración de IPTG para maximizar la producción enzimática, y las proteínas fueron purificadas por cromatografía de intercambio iónico y FPLC. Por primera vez se determinaron los parámetros cinéticos Km, Vmax y Ki. La PK presentó una cinética Michaelis-Menten para sus sustratos PEP y ADP, con inhibición competitiva por ATP y acompetitiva por piruvato, sugiriendo un mecanismo de regulación glucolítica sensible al estado energético celular. En tanto, la PFK-1 mostró una Km de 3.26 mM para F6P, con inhibición por sustrato del ATP a concentraciones superiores a 1 mM y ausencia de regulación por citrato y malato, a diferencia de otras PFK-1 eucariotas. Además, el ADP fue un inhibidor competitivo y la F1,6BP, acompetitivo. Estos resultados indican mecanismos regulatorios particulares en U. maydis, posiblemente adaptativos, que podrían ser útiles en aplicaciones biotecnológicas orientadas a la optimización metabólica para la producción de compuestos de interés".pdfspaCIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍATecnología química--Biotecnología--Producción, modificación y aplicaciones biotecnológicas de compuestos individuales o clases de compuestos--Especial--EnzimasExpresión genética--InvestigaciónEnzimas--InhibidoresEnzimas--PurificaciónTesis de licenciaturaopenAccess