Clonación y secuenciación de una proteína hipotética coiled-coil de Azospirillum sp. B510

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2015-05
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Benemérita Universidad Autónoma de Puebla
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"Las bacterias tienen un citoesqueleto (CSK) multifuncional constituido por proteínas homólogas y no homólogas a las proteínas que forman el CSK eucariótico; ambas están implicadas en funciones principales, tales como morfogénesis, división celular, partición de DNA (ácido desoxirribonucleico) y movilidad. Un tipo de proteínas homólogas son las proteínas semejantes a filamentos intermedios (FIs), caracterizados por contener estructuras coiled-coil, tal como la proteína crescentina (CreS) de Caulobacter crescentus implicada en el desarrollo de su curvatura morfológica. Se seleccionó una proteína con estructura hipotética coiled-coil de la cepa Azospirillum sp. B510 para clonar y secuenciar su gen en Escherichia coli y conocer posteriormente si esta proteína es del tipo FIs y la función que desempeña. Se diseñaron los cebadores fuera del marco de lectura del gen de la proteína hipotética coiled-coil establecido en el banco genómico de Azospirillum sp. B510, se amplificó el fragmento de DNA mediante PCR (reacción en cadena de la polimerasa) y se ligó al sistema de clonación pCR 2.1-TOPO TA. La secuencia del gen tuvo 97% de identidad con el DNA de la proteína coiled-coil hipotética del banco de Azospirillum sp. B510".
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