Estudio de la cascada que inica el sistema de dos componentes GacS/GacA involucrado en la producción de biopolimeros en Azotobacter vinelandii
Date
2004
Authors
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Publisher
Benemérita Universidad Autónoma de Puebla
Abstract
En las bacterias, los sistemas reguladores de dos componentes son el principal mecanismo de transducción de señales mediante el cual contienden y responden a cambios o señales del medio ambiente.
En Azotobacter vinelandii, el sistema de dos compornentes GacS/GacA regula la producción de biopolímeros controlando la transcripción de genes con promotores reconocidos por factores sigma o del tipo σε, σε y promotores que no muestran un consenso conocido). La regulación transcripcional de genes con promotores tipo o se ejerce por el control transcripcional que GacA ejerce sobre rpos (el gen que codifica para σ), aunque de igual forma se desconoce si esta regulación es directa o indirecta. No se conoce la forma en la cual el sistema GacS/GacA regula la transcripción de promotores σ y aún menos el mecanismo de control que ejerce sobre los promotores de naturaleza desconocida.
Por lo anterior, creemos que la regulación que ejerce el sistema GacS/GacA sobre la producción de polímeros en A. vinelandii ocurre de manera indirecta, y que esta involucra una serie de reguladores que median el control de sus genes blanco. Por otra parte, es muy probable que el sistema GacS/GacA como ocurre en otros modelos, controle la expresión de otros productos de metabolismo secundario.
El objetivo de este trabajo fue encontrar elementos genéticos que estén bajo el control del sistema GacS/GacA. Para iniciar el estudio se construyó un banco de fusiones transcripcionales activas con el transposón miniTn5gusA40 Para encontrar estos blancos de regulación se aprovechó el efecto represor que gacs ejerce cuando es sobre expresado en trans. Dicha sobre expresión se logró al introducir en A. vinelandii el gen gacs clonado en un plásmido de mediano número de copias (PLM51). El plásmido recombinante se conjugó a las cepas del banco de fusiones transcripcionales activas, y se observó en estas condiciones el apagado el apagado de tres fusiones transcripcionales, las cepas seleccionadas fueron llamadas LM47, LM60 y LM98. La cepa LM98 mostro una disminución en la producción de alginato y PHB en comparación con la cepa silvestre UW136 indicando que el elemento seleccionado está relacionado de alguna manera en la producción de estos biopolímeros.