Expresión heteróloga de la versión trunca de enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2)

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dc.contributor.authorAlmanza Rodríguez, Guillermo; Tobón Pérez, Domingo Ezequiel
dc.creatorhttps://orcid.org/0009-0008-1946-6536
dc.date.accessioned2023-10-15T18:39:31Z
dc.date.available2023-10-15T18:39:31Z
dc.date.issued2023-10-14
dc.description.abstractLa pandemia de COVID-19, causada por el virus SARS-CoV-2, ha impulsado la realización de numerosos estudios y experimentos con el objetivo de comprender mejor la enfermedad y desarrollar estrategias para su control. En este sentido, se han llevado a cabo investigaciones dirigidas a entender el funcionamiento del virus y su interacción con el huésped. Estos esfuerzos han permitido avanzar en el desarrollo de vacunas y fármacos para hacer frente a la enfermedad. Una de las estrategias iniciales y más importantes es el estudio de la interacción con el receptor del virus. Se sabe que la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2, por sus siglas en inglés) es la molécula receptora del virus. Por su parte el SARS-CoV-2 interactúa por medio de un dominio de unión a receptor (RBD, por sus siglas en inglés) el cuál, es el responsable de la interacción con el receptor. Comprender esta interacción es fundamental para el diseño de fármacos que puedan prevenir la unión entre el virus y su receptor. Para ello, se han utilizado diferentes enfoques, que incluyen el estudio tanto de versiones completas del receptor como de versiones truncadas, las cuales representan formas parciales o modificadas del receptor. En el presente reporte se describe el procedimiento de expresión y purificación de una versión truncada del receptor ACE2, producida de manera recombinante en células E. coli. Se generó la construcción pET28b(+)-tACE2 al insertar una porción del gen del receptor ACE2 en el plásmido pET-28b(+), y posteriormente se clonó este vector en células E. coli DH5α. La expresión de la proteína tACE2 se realizó en células E. coli BL21-CodonPlus (DE3). Posteriormente, se emplearon técnicas de desnaturalización con urea y cromatografía de columna de afinidad con resina de níquel, seguidas de técnicas de diálisis para el replegamiento de la versión truncada del ACE2 (tACE2).
dc.folioEsmos 60
dc.formatpdf
dc.identificatorsrsc:SCB15
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.12371/19220
dc.language.isospa
dc.publisherBenemérita Universidad Autónoma de Puebla
dc.rights.accesopenAccess
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0
dc.subject.classificationNATURAL SCIENCES
dc.titleExpresión heteróloga de la versión trunca de enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2)
dc.typeContribución a publicación periódica
dc.type.conacytcontributionToPeriodical
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La pandemia de COVID-19, causada por el virus SARS-CoV-2, ha impulsado la realización de numerosos estudios y experimentos con el objetivo de comprender mejor la enfermedad y desarrollar estrategias para su control. En este sentido, se han llevado a cabo investigaciones dirigidas a entender el funcionamiento del virus y su interacción con el huésped. Estos esfuerzos han permitido avanzar en el desarrollo de vacunas y fármacos para hacer frente a la enfermedad. Una de las estrategias iniciales y más importantes es el estudio de la interacción con el receptor del virus. Se sabe que la enzima convertidora de angiotensina 2 (ACE2, por sus siglas en inglés) es la molécula receptora del virus. Por su parte el SARS-CoV-2 interactúa por medio de un dominio de unión a receptor (RBD, por sus siglas en inglés) el cuál, es el responsable de la interacción con el receptor. Comprender esta interacción es fundamental para el diseño de fármacos que puedan prevenir la unión entre el virus y su receptor. Para ello, se han utilizado diferentes enfoques, que incluyen el estudio tanto de versiones completas del receptor como de versiones truncadas, las cuales representan formas parciales o modificadas del receptor. En el presente reporte se describe el procedimiento de expresión y purificación de una versión truncada del receptor ACE2, producida de manera recombinante en células E. coli. Se generó la construcción pET28b(+)-tACE2 al insertar una porción del gen del receptor ACE2 en el plásmido pET-28b(+), y posteriormente se clonó este vector en células E. coli DH5α. La expresión de la proteína tACE2 se realizó en células E. coli BL21-CodonPlus (DE3). Posteriormente, se emplearon técnicas de desnaturalización con urea y cromatografía de columna de afinidad con resina de níquel, seguidas de técnicas de diálisis para el replegamiento de la versión truncada del ACE2 (tACE2).
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