Efecto citotóxico y citopático por H. pylori en la línea celular hep-2
Date
1993
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Publisher
Benemérita Universidad Autónoma de Puebla
Abstract
Estudiar el efecto citotóxico y citopático *h. pylori en la línea celular hep-2 como eventos principales en el mecanismo de patogénesis.
La investigación aborda el estudio de Helicobacter pylori (previamente clasificado como Campylobacter pylori), una bacteria asociada con inflamación del tubo digestivo superior, gastritis crónica, úlcera péptica, dispepsia no ulcerosa y cáncer gástrico. El trabajo se enfoca en evaluar los mecanismos de patogenicidad del microorganismo, específicamente la presencia de citotoxinas capaces de inducir alteración o vacuolización intracelular en sistemas celulares in vitro.
Metodología
Cepas bacterianas: Se utilizó la cepa de referencia H. pylori CCUG15818 (proveniente de la Universidad de Gotemburgo, Suecia) y cepas clínicas aisladas en el Instituto Nacional de Nutrición Salvador Zubirán (INN56-88 e INN82-82, provenientes de pacientes con patologías gástricas y esofágicas).
Obtención de componentes bacterianos: Los cultivos masivos se procesaron bajo condiciones de microaerofilia (85\%\text{ N}_2, 10\%\text{ CO}_2, 5\%\text{ O}_2) a 37 °C para la preparación de filtrados concentrados (mediante ultrafiltración en Amicon XM100), precipitados con sulfato de amonio, sobrenadantes sonicados y extractos prensados a alta presión.
Cultivo y preparación celular: Se mantuvieron cultivos confluentemente crecidos de células HEp-2 en medio MEM-E suplementado con 10% de suero fetal bovino. Tras la tripsinización, el conteo celular se realizó en cámara de Neubauer con tinción de azul de tripano, sembrando placas de 96 y 24 pozos (5\times 10^4 células/pozo).
Evaluación de daño celular: Se evaluó el efecto vacuolizante y citotóxico mediante microscopía de contraste de fases, tinción con cristal violeta y ensayo de tinción con rojo neutro (extrayendo el colorante con alcohol ácido y solución salina al 0.85%).
Conclusiones Principales
El estudio valida metodologías cualitativas y cuantitativas para demostrar la actividad patogénica de los productos y citotoxinas secretadas o constitutivas de H. pylori sobre el modelo epitelial HEp-2, permitiendo caracterizar la vacuolización intracelular y la muerte celular provocadas por los extractos bacterianos