Construcción parcial de un plásmido para deletar el operón pqq de Azospirillum brasilense Sp7
Date
2025
Authors
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Publisher
Benemérita Universidad Autónoma de Puebla
Abstract
“Azospirillum brasilense Sp7 es una bacteria ocasional de intestino humano y una de las rizobacterias promotoras del crecimiento vegetal más estudiadas, conocida por ser fijadora de nitrógeno, productora de biopelícula, fitoreguladores, ácido indol-3-acético y sideróforos con función biocontroladora. En su genoma se encuentran los genes para la biosíntesis de PQQ (pqqABCDE), un cofactor de enzimas deshidrogenasas como la glucosa
deshidrogenasa, la cual se ha reportado que participa en la solubilización de fosfatos. Con este proyecto se pretende obtener una mutante por deleción de operón pqq de Azospirillum brasilense Sp7 mediante una doble recombinación homóloga, intercambiando el operón pqq por un gen de resistencia a antibiótico. Se delimitaron las regiones río arriba y río abajo del operón pqq y se diseñaron oligonucleótidos para ambas regiones. Se amplificó la región río abajo, denominado brazo derecho, y se clonó en el vector plasmídico pGEM-T Easy. El gen de resistencia a gentamicina se obtuvo mediante restricción enzimática a partir del plásmido pBSL142, el cual se clonó junto al brazo derecho. Con esto se obtuvo una construcción parcial para posteriormente clonar el brazo izquierdo y continuar con la estrategia de trabajo para obtener la mutante por deleción del operón pqq de A. brasilense Sp7”.
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