Construcción de vectores para la expresión de antígenos de Avibacterium paragallinarum

Date
2015-11
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"Este proyecto cuyo objetivo fue la elaboración de construcciones plasmídicas para expresar heterólogamente algunos polipéptidos de Avpg con potencial antigénico para suplementar a futuras vacunas. Para esto se diseñaron oligonucléotidos que se usaron como iniciadores para amplificar por PCR, diferentes fragmentos de los genes que codifican las proteínas Hemaglutinina, Rtx y OmpA. Los amplificados fueron clonados en el vector pBluescriptII KS (-) y posteriormente subclonados en el vector de expresión pQE30. Los experimentos de expresión se hicieron en E. coli M15, o BL21 pLysS, por inducción con diferentes concentraciones de IPTG, sin observar expresión de nuevas proteínas en SDS-PAGE. El estudio por secuenciación de las construcciones plasmídicas mostró una mutación por deleción en la región (-10) del promotor que dirigiría la expresión en el vector pQE30, para las construcciones de la región uno de hemaglutinina y la región uno de OmpA. Esta mutación también se encontró en pQE31 y pQE32 con la región dos de OmpA (OmpA2)".
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