Determinacion de un marcador molecular para la tipificacion e identificacion de Haemophilus Influenzae
Date
2003
Authors
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Publisher
Benemérita Universidad Autónoma de Puebla
Abstract
Haemophilus influenzae está ampliamente distribuido y adaptado a la población humana, usualmente presente en nasofaringe de niños y adultos saludables, sin causarles daño, a menos que logre vencer el sistema inmune. Es raro encontrarlo en cavidad oral y no se ha detectado en otra especie animal (Tang et al., 2001) Haemophilus influenzae, es un cocobacilo Gram negativo de 1 x 0.3 µm, aerobio o anaerobio facultativo, pleomórfico, no móvil, no forma esporas, no produce exotoxinas demostrables y pertenece a la familia Pasteurellaceae. Se subdivide en formas con y sin cápsula (Rao et al., 1999; Tang et al., 2001). Son dos los sistemas establecidos para la clasificación de H. influenzae: 1) producción de capsula, que a su vez se subdivide en seis tipos serológicos: a-f y 2) biotipificación, en base a tres pruebas bioquímicas: producción de indol, ureasa y ornitina descarboxilasa (Saito et. al., 1999); además Foxwell et al., (Foxwell et al., 1998) consideran 1) diferenciación por peso molecular o 2) por heterogeneidad antigenica de proteinas de membrana externa (PME); 3) clasificación por heterogeneidad antigenica de lipooligosacárido (LOS); 4) determinación de diferencias genéticas por tipificación electroforética; 5) polimorfismo de la longitud de fragmentos de restricción y 6) amplificación por PCR como posibles sistemas de clasificación. Haemophilus influenzae para su crecimiento requiere de un medio complejo con factores de crecimiento presentes en la sangre, especificamente los factores X (hemo). V (NAD O NADP*) y IX (protoporfirina o protohemoglobina que contenga hierro), además de CO₂. Crece en forma óptima entre 35 y 37°C y es quimiorganotrófico y parásito obligado de las membranas mucosas de humanos (Foxwell et al., 1998, Rao et al., 1999; Tang et al., 2001). La patogénesis de infecciones por H. influenzae aún no se entiende en su totalidad, se sabe que la presencia del polisacárido capsular es el principal factor de virulencia. Los microorganismos encapsulados penetran el epitelio de la nasofaringe e invaden los capilares sanguineos directamente. Su cápsula les permite resistir a la fagocitosis y a la lisis mediada por complemento en el hospedero no inmune. Las cepas de HiNT no poseen cápsula, son menos invasivas, pero son capaces de inducir una respuesta inflamatoria causante de enfermedad (Todar, 1999). H. influenzae tipo b es el serotipo más virulento, porque se involucra en forma más frecuente en la producción de infecciones meningeas en niños; por el contrario, en los adultos las cepas no tipificables de H. influenzae son la causa común de infecciones y se presume que adquieren anticuerpos en forma natural contra la cápsula tipo b (Todar, 1999). Prácticamente todos los pacientes con meningitis por H. influenzae, tratados en forma temprana, se recuperan. El grado de mortalidad es inferior al 10%, pero cerca del 30% de los niños recuperados sufren efectos neurológicos residuales como retardo mental, pérdida de la audición y alteración de lenguaje. La ampicilina es el antibiótico de elección, pero 20% o más de las cepas de H. influenzae son resistentes, debido a la producción de ẞ-lactamasa mediada por un plásmido (Todar, 1999). Las observaciones de transformación genética en H. influenzae incluyen resistencia a drogas y sintesis de antígenos capsulares específicos. La transformación de H. influenzae ocurre por diferentes mecanismos y es más eficiente que en las bacterias entéricas. Cuando se encuentra en competencia, la bacteria desarrolla vesículas en la membrana externa, llamadas transformasomas, que contienen una proteina especifica de unión a DNA. Esta proteína reconoce una secuencia específica de DNA de 11 pares de bases (pb) que aparece en el DNA de Haemophilus con mayor frecuencia que en otros géneros de bacterias. Haemophilus es capaz de sufrir transformación interespecie e intraespecie in vivo (en tejidos del hospedero) (Malin et al, 1999; Todar, 1999).