Generación de mutantes puntuales del gen cdgD en Azospirillum baldaniorum Sp245
Date
2026-01
Authors
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Publisher
Benemérita Universidad Autónoma de Puebla
Abstract
“Las rizobacterias promotoras del crecimiento vegetal (PGPR), como Azospirillum baldaniorum Sp245, dependen del segundo mensajero c-di-GMP para ajustar la transición entre estilos de vida móviles y sésiles durante la colonización de la rizosfera. En esta especie, la proteína híbrida CdgD presenta la arquitectura CHASE–PAS–GGDEF–EAL, lo que sugiere que combina dominios sensores con dominios catalíticos para controlar los niveles de c-di-GMP. El objetivo de la investigacion fue estudiar cómo el dominio PAS y los centros catalíticos GGDEF y EAL de CdgD influyen en la motilidad de A. baldaniorum Sp245. Para ello, se generaron mutantes puntuales en los motivos conservados GGDEF (mutante GGKEF, D584K) y EAL (mutante AAL, E710A) para modificar de forma específica las actividades de diguanilato ciclasa y fosfodiesterasa de estos dominios proteicos. De manera paralela, se realizó un análisis bioinformático del dominio PAS de la CdgD, realizando un modelado con I-TASSER, con el que se comparó con dominios PAS cristalizados, el modelado estructural y el alineamiento con dominios PAS cristalizados confirmaron que el dominio conserva el pliegue α/β característico y se identificaron regiones importantes dentro de su cavidad interna: una cisteína central (Cys407) y una hélice α conservada. Con base en este análisis, se diseñaron dos mutantes adicionales en el dominio PAS: C407S y la eliminación de la α hélice conservada (α2). Las mutantes puntuales se realizaron en el plásmido pBBRcdgD”.
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