Optimización de la expresión, purificación y caracterización de la piruvato cinasa y la fosfofrutocinasa-1 del fitopatógeno Ustilago maydis

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dc.audiencegeneralPublic
dc.contributorRomero Aguilar, Lucero
dc.contributorMorales Lara, Laura
dc.contributor.advisorROMERO AGUILAR, LUCERO; 349302
dc.contributor.advisorMORALES LARA, LAURA; 95428
dc.contributor.authorMartínez Acosta, Rodrigo
dc.date.accessioned2025-05-26T21:51:38Z
dc.date.available2025-05-26T21:51:38Z
dc.date.issued2025-02
dc.description.abstract"En este estudio se optimizó la expresión y caracterización cinética de las enzimas recombinantes piruvato quinasa (PK) y fosfofructocinasa-1 (PFK-1) de Ustilago maydis mediante el uso del vector pET-28a y distintas cepas de Escherichia coli como sistema de expresión. Se evaluaron variables como temperatura, tiempo de inducción y concentración de IPTG para maximizar la producción enzimática, y las proteínas fueron purificadas por cromatografía de intercambio iónico y FPLC. Por primera vez se determinaron los parámetros cinéticos Km, Vmax y Ki. La PK presentó una cinética Michaelis-Menten para sus sustratos PEP y ADP, con inhibición competitiva por ATP y acompetitiva por piruvato, sugiriendo un mecanismo de regulación glucolítica sensible al estado energético celular. En tanto, la PFK-1 mostró una Km de 3.26 mM para F6P, con inhibición por sustrato del ATP a concentraciones superiores a 1 mM y ausencia de regulación por citrato y malato, a diferencia de otras PFK-1 eucariotas. Además, el ADP fue un inhibidor competitivo y la F1,6BP, acompetitivo. Estos resultados indican mecanismos regulatorios particulares en U. maydis, posiblemente adaptativos, que podrían ser útiles en aplicaciones biotecnológicas orientadas a la optimización metabólica para la producción de compuestos de interés".
dc.folio20250130124102-8137-TL
dc.formatpdf
dc.identificator6
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/20.500.12371/28417
dc.language.isospa
dc.matricula.creator201911742
dc.publisherBenemérita Universidad Autónoma de Puebla
dc.rights.accesopenAccess
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0
dc.subject.classificationCIENCIAS AGROPECUARIAS Y BIOTECNOLOGÍA
dc.subject.lccTecnología química--Biotecnología--Producción, modificación y aplicaciones biotecnológicas de compuestos individuales o clases de compuestos--Especial--Enzimas
dc.subject.lccExpresión genética--Investigación
dc.subject.lccEnzimas--Inhibidores
dc.subject.lccEnzimas--Purificación
dc.thesis.careerLicenciatura en Biotecnología
dc.thesis.degreedisciplineÁrea de Ciencias Naturales y de la Salud
dc.thesis.degreegrantorFacultad de Ciencias Biológicas
dc.thesis.degreetoobtainLicenciado (a) en Biotecnología
dc.titleOptimización de la expresión, purificación y caracterización de la piruvato cinasa y la fosfofrutocinasa-1 del fitopatógeno Ustilago maydis
dc.typeTesis de licenciatura
dc.type.conacytbachelorThesis
dc.type.degreeLicenciatura
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