Caracterización funcional de una proteína híbrida con actividades presuntivas de diguanilato ciclasa y fosfodiesterasa de Azospirillum brasilense Sp245
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Date
2017-01
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Benemérita Universidad Autónoma de Puebla
Abstract
"En este trabajo llevamos a cabo dos estrategias de estudio: a) en la primera generamos un modelo estructural in sillico para predecir su probable función. Para tal efecto utilizamos los programas I-Tasser, VMD y Chimera, usando como molde el cristal de la proteína MorA de pseudomonas aeruginosa (4RNF). b) en la segunda estrategia expresamos, purificamos y determinamos la actividad de PDE y DGC de la proteína recombinante expresada en E. coli BL21 con el plásmido pGEX4T-1, para medir las actividades utilizamos como sustratos el p-nitrofenilfosfato (pnpp) y GTP radioactivo, respectivamente. Datos experimentales de la actividad de PDE in vitro proponen que la proteína sustenta actividad de PDE ya que desdobla el pnpp el cual posee un enlace fosfodiester análogo al que se encuentra en el di-GMPc. Mientras que, la actividad de DGC probablemente no ocurra ya que no hemos obtenido la formación del di-GMPc bajo las condiciones de ensayo".
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