Estudio de la regulación transcripcional del gen rsmB en Azotobacter vinelandii
Date
2005
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Publisher
Benemérita Universidad Autónoma de Puebla
Abstract
En algunas bacterias el sistema GacS/GacA controla indirectamente la producción de metabolitos secundarios, regulando a su vez otros sistemas de regulación como el factor , sistemas de "Quorum sensing y el sistema de regulación post-transcripcional RsmA/RsmB. En A. vinelandii, el sistema de doble componente GacS/GacA controla la producción de los biopolimeros de importancia industrial PHB y alginatos.
El factor sigma S (5) es un intermediario a través del cual GacS/A regula la producción de PHB y alginatos. Proponemos que el sistema de regulación post-transcripcional RsmA/RsmB forma parte de una cascada reguladora a través de la cual GacS/GacA controla la producción de ambos polímeros.
Mediante ensayos de expresión de la fusión transcripcional rsmB-gusA en plásmido y ensayos de hibridación tipo "Northern blot" sugerimos que el gen rsmB se encuentra posicionado corriente abajo en la cascada de regulación iniciada por el sistema GacS/GacA, en donde GacA regula la transcripción de rsmB. Asi mismo determinamos que ese control se ejerce a lo largo de la curva de crecimiento de A. vinelandii.
Determinamos mediante un ensayo de hibridación tipo Northern blot, que aún cuando el factor of participa en la cascada reguladora a través de la cual GacS/A controla la producción de alginatos y PHB, éste no participa como intermediario en la regulación que GacA ejerce sobre rsmB, ya que al hibridar RNA total de una cepa mutante rpos de A. vinelandii contra una sonda que contiene el locus rsmB, se observó la expresión de rsmB.
Finalmente determinamos algunas condiciones de expresión del gen rsmB. Observamos una expresión diferencial de rsmB en medios de cultivo adicionados con fuentes de carbono de diferente origen, mostrando una mayor expresión en medios con fuente de carbono de origen gluconeogénico, hecho que sugiere la posible participación del gen rsmB en el control de la producción de algunas enzimas participantes en la gluconeogénesis. Destacando de manera particular la observación de que el gen rsmB se expresa únicamente bajo condiciones diazotróficas. Siendo la primera vez que se relaciona genéticamente el metabolismo del nitrógeno con la regulación en la producción de alginatos en A. vinelandii.