Desarrollo de una plataforma molecular con el sistema CRISPR-cas13 para el procesamiento de ARN en plantas
Date
2026-01
Authors
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Publisher
Benemérita Universidad Autónoma de Puebla
Abstract
"El sistema CRISPR-Cas se ha convertido en una herramienta novedosa para la edición de sitios específicos de genomas al tener una actividad dirigida por moléculas de ARN guía, siendo el más conocido CRISPR-Cas9, sin embargo, existen otros sistemas que involucran otras proteínas Cas, tal es el caso de Cas13, cuya actividad es dirigida a ARN, lo que ha dado lugar a investigaciones sobre su uso en mecanismos moleculares que involucren la regulación a nivel transcriptómico. Este trabajo tiene como objetivo desarrollar una plataforma molecular que contenga los componentes necesarios para el funcionamiento del sistema CRISPR-Cas13 en plantas. Para la construcción de la plataforma se amplificaron por PCR el promotor NOS, la secuencia correspondiente al ARNg y la secuencia codificante de Cas13, las cuales fueron integradas por ligación al plásmido de expresión para plantas PHD-m-Cherry, con el cual se transformó a la bacteria Escherichia coli cepa DH5αCT, se realizó la selección de colonias transformantes y la extracción de plásmidos recombinantes; para corroborar la construcción genética realizada, se amplificaron de los fragmentos correspondientes al promotor NOS, el ARNg y el gen Cas13, además de verificarse su identidad mediante secuenciación y comparación mediante Blast y alineamiento de secuencias, una vez hecha dicha comprobación, se realizó la transformación de una cepa de Agrobacterium tumefaciens con la cual se transformaron por agroinfiltración plantas de Nicotiana tabacum para comprobar la transcripción del gen Cas13".
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