Teis de Maestría

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https://hdl.handle.net/20.500.12371/21039

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Metodo para el calculo de las caracteristicas hidraulicas en conductos a superficie libre de geometria comun. Un nuevo enfoque. Generalizacion a tanques amortiguadores convencionales
(Universidad Juarez Autonoma de Tabasco, 1982) Valle Cuellar, Joaquin
El principal objetivo de esta tesis, es de encontrar un método sencillo y de fácil aplicación por medio del cual puedan obtenerse con buena aproximación y sin necesidad de realizar tanteos o consultar tablas y gráficas, los tirantes normal y crítico con que el agua circula en conductos de geometría común. Para ello, habrán de analizarse diversos métodos de solución aproximada. En base a que el problema que se pretende solucionar es susceptible de representación gráfica, se hará uso del método de ajuste de curvas conocido como de los "mínimos cuadrados", para obtener la ecuación general con la cual se encuentre un valor del tirante muy próximo a la solución exacta. Sólo serán analizadas aquellas secciones de geometría común que se utilizan en la conducción del agua. Sin embargo, el método es aplicable a toda sección y aún en la solución de cualquier otro problema de ingeniería susceptible de solución gráfica. Es por ello y una vez que se haya demostrado la aplicabilidad del método en canales que, como segundo objetivo, mediante idéntica técnica, se obtendrán fórmulas que simplifiquen el diseño de tanques amortiguadores de energía de sección rectangular. Dada la cantidad de números, gráficas y fórmulas a utilizar, es que en el desarrollo del presente trabajo y según se crea conveniente, se intercalarán páginas mecanografiadas y escritas a Leroy. Al final de cada capítulo se anotarán las referencias bibliográficas correspondientes al mismo. Siempre que no se indique lo contrario será utilizado el sistema métrico decimal.
Aislamiento y caracterizacion de cepas de Acetobacter diatrophicus de caña de azucar: Purificacion parcial de la nitrogenasa de A.diazotrophicus
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 1998) Pardo Ruiz, Maria Augusta Patricia; Eugenia Baca, Beatriz
Las primeras observaciones sobre interacciones de microorganismos que fijan nitrógeno con plantas no leguminosas, se evidenciaron cuando se aisló Beijerinckia spp en la rizosfera de la caña de azúcar y a Azotobacter paspalii en asociación con Paspalum notatum, (Döbereiner 1961). Una considerable actividad de nitrogenasa, asociada con las raíces de caña de azúcar fue detectada por diferentes autores usando el ensayo de reducción de acetileno (ARA) (Döbereiner et al 1972, Purchase 1980). El primer intento para cuantificar la contribución de la fijación biológica de nitrógeno (FBN) a las plantas fue realizado por Ruschel et al (1975) quienes reportaron una clara incorporación de N15 gaseoso en plantas intactas de 90 días de crecimiento. Sin embargo, sólo hasta que se usaron las técnicas de balance de nitrógeno y dilución de N15, pudo evaluarse la contribución de la FBN en el ciclo de desarrollo de esta planta (Lima et al 1987, Urquiaga et al 1992). Aún antes de que datos exactos cuantificaran la contribución de la FBN en el desarrollo de la caña de azúcar, muchas géneros de bacterias fijadoras de nitrógeno se habían aislado de la rizosfera, raíz, tallos y algunas hojas de la caña de azúcar, dentro de éstas podemos mencionar Beijerinckia, Azospirillum, Azotobacter, Erwinia, Derxia y Enterobacter spp, (Purchase 1980, Dobereiner 1961)) Recientemente se ha aislado una nueva especie de bacteria fijadora de nitrógeno Acetobacter diazotrophicus, que se presenta en gran cantidad en las raíces y tallos de la caña de azúcar (Cavalcante & Döbereiner 1988, Gillis et al 1989). Este diazótrofo, originalmente aislado en medios semisólidos con jugo de caña de azúcar, es un bacilo aerobio Gram negativo, que se desarrolla formando una película en medios semisólidos libres de nitrógeno con 10% de sacarosa, después de 7 a 10 días de desarrollo forma una película delgada en la superficie, este desarrollo mejora cuando la concentración de glucosa y sacarosa es alta (10%). La producción de ácido provoca una disminución del pH hasta 3 o menos, pero su crecimiento y la fijación de nitrógeno continua a este pH por varios días, (Stephan et al 1991). Esta bacteria no posee nitrato reductasa lo cual le permite desarrollarse a altas concentraciones de nitrato, el amonio causa sólo la inhibición parcial de la actividad de la nitrogenasa, especialmente cuando la bacteria se desarrolla en 10% de sacarosa (Texeira et al 1987, Boddey et al 1991), también muestra una alta tolerancia al oxígeno en vida libre, (Reiss et al 1990). La bacteria se ha aislado de muchas variedades de caña de azúcar en diferentes regiones de Brasil, Cuba, Australia y México, (Fuentes Ramírez et al 1992, Li & Macrae 1991). La FBN en todos los microorganismos diazótrofos está mediada por el sistema enzimático de las nitrogenasas, éstas no muestran diferencias importantes cuando se aislan y purifican. Los mecanismos por los cuales se protege este sistema enzimático de la acción del oxígeno, marcan la diferencia de un microorganismo diazótrofo a otro. Las características particulares de la FBN en A. diazotrophicus como son: un metabolismo oxidativo activo, tolerancia de los microorganismos intactos a altas tensiones de oxígeno y continuar la fijación de nitrógeno aún a pH de 2.5 hacen interesante el estudio de la nitrogenasa de este microorganismo y de los mecanismos por los cuales este proceso es resistente a las altas tensiones de oxígeno y los bajos pHs. En el presente trabajo, logramos aislar nueve cepas de A. diazotrophicus a partir de 150 muestras de diferentes cultivos, 135 fueron de caña de azúcar, 12 de maíz y 3 de pasto forrajero. Las nueve cepas fueron aisladas de caña de azúcar, una se aisló de raíz principal y ocho del tallo; éstas se caracterizaron por métodos microscópicos, tintoriales, bioquímicos y fisiológicos, asimismo, se determinó su capacidad de fijación de nitrógeno en presencia y ausencia de nitrato. Lo anterior se realizó con la finalidad de seleccionar, una cepa nativa que fuera buena fijadora de nitrógeno, comparando la actividad específica de nitrogenasa de las cepas nativas y tipo. Se eligió a la cepa tipo PAL5. Esta cepa se eligió debido a que: fue la cepa que mostró mayor actividad específica de enzima en comparación con otras cepas tipo y con las cepas nativas. Con Acetobacter diazotrophicus PAL 5 se realizaron ensayos para determinar las condiciones óptimas de cultivo masivo en un fermentador. Una vez obtenido el cultivo masivo se lisaron las células y se determinaron las condiciones óptimas para la actividad de nitrogenasa en un extracto crudo; a partir de este extracto se realizó la purificación parcial de la enzima, por medio de cromatografía en columna de intercambio iónico, se detectó la presencia de la enzima en las fracciones por medio de anticuerpos policlonales anti Avl y Av2, utilizando la técnica de inmunoelectrotransferencia y por la técnica de ARA. Lográndose detectar una de las fracciones de la enzima. Por último se determinó la actividad de la enzima en cultivos que se desarrollaron en diferentes tensiones de oxígeno, la detección se realizó utilizando las dos técnicas antes mencionadas. Detectando que la enzima presentaba mayor actividad a tensión de oxígeno de un 4% v/v y posteriormente decaía su actividad, lo que concuerda con el comportamiento de otras nitrogenasas que se han purificado de microorganismos aerobios, por la técnica de inmunoelectrotransferencia se logró detectar que a mayor porcentaje de oxígeno en el medio, aumentaba la cantidad de una de las fracciones.
Elaboración y evaluacion de un embutido adicionado con amaranto
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 1998) Perez Canales, Areli; Perez Ambrosio, Cecilio
"Los embutidos constituyen una de las formas de conservación de los productos cárnicos mas prácticas y agradables para el consumidor. Entre ellos el chorizo y la longaniza son tal vez los de mayor aceptación en la dieta de los mexicanos. Se elaboro un producto con características de chorizo sustituyendo un 30% de carne de cerdo por harina de amaranto, se siguió el proceso de la formula tradicional para la elaboración de chorizo común. Se utilizo carne picada, conservadores especias y un proceso de maduración. EI producto elaborado fue comparado con un producto comercial, el cual se les proporcionó a 80 consumidores para saber el grado de aceptación. Los resultados fueron procesados estadísticamente mediante la prueba Ji-Cuadrada. Al embutido se le realizaron las pruebas para cumplir con las Normas Oficiales Mexicanas. EI Análisis Microbiológico, indica una calidad sanitaria aceptable, no encontrándose microorganismos patógenos para el consumidor. El resultado Fisicoquímico eporto los siguientes resultados: Humedad 30.3%, Fibra Cruda 6.4%, ELN 4.2%, Proteinas 18.3%, Extracto Etéreo 34.8%, Cenizas 5.15%. El contenido de nitritos resulta por debajo de la Norma Oficial Mexicana. Por lo mencionado anteriormente, se concluye que el producto elaborado es una alternativa de consumo para los diferentes niveles económicos, ya que se incrementa su valor proteínico"
Concentrado de amaranto
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 1998) Caballero Rosas María Eugenia; Perez Ambrosio, Cecilio
"El concentrado de amaranto es un producto derivado del amaranto, una planta originaria de América que se cultiva principalmente por sus granos, ricos en proteínas, fibra, minerales y vitaminas. El concentrado se obtiene mediante un proceso de molienda y separación, que elimina parte de los almidones presentes en el grano para concentrar su contenido nutricional, especialmente las proteínas y aminoácidos esenciales, como la lisina. Para su obtención, es necesario realizar un proceso de molienda controlada que permita maximizar el rendimiento nutricional, seguido de la separación de componentes, como los almidones, para concentrar las fracciones ricas en proteínas y fibra. Además, se emplean métodos de secado y, en algunos casos, extrusión para mejorar su conservación y facilitar su integración en productos alimenticios. Es altamente valorado por su perfil nutricional, ya que contiene una mezcla balanceada de nutrientes, lo que lo convierte en un alimento ideal para dietas vegetarianas y veganas. Tiene un bajo contenido en gluten, lo que lo hace apto para personas con intolerancia a esta proteína. El concentrado de amaranto se utiliza en la elaboración de productos como barras energéticas, panes, galletas, cereales y suplementos nutricionales. Para garantizar su calidad, el proceso de obtención debe cumplir con requisitos de higiene estrictos y controlar el contenido de metales pesados y otros contaminantes. También es importante que el grano de amaranto utilizado sea de buena calidad, libre de hongos o plagas, lo cual asegura que el concentrado sea seguro para el consumo humano."
Crecimiento y caracterizacion de peliculas delgadas de CdS obtenidas por el metodo de deposicion en baño quimico
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 1999) Rivera Flores, Bertha Luisa; Gracia Jimenez, Justo Miguel
Los compuestos semiconductores II-VI tienen una gran importancia tecnológica por sus aplicaciones en la fabricación de dispositivos optoelectrónicos. Debido a esto, es necesario obtener estos materiales con propiedades físicas y químicas de alta calidad. Así, estos compuestos se pueden obtener en forma de películas delgadas por una gran cantidad de técnicas como son evaporación por dispersión al vacio, electrodeposición, pirólisis y deposición en baño químico entre otras. De esta manera, se obtienen semiconductores los cuales presentan una gran variedad tanto en el grado de cristalinidad como en la calidad óptica. El método por deposición en baño químico (DBQ), es una técnica relativamente sencilla, ya que sólo requiere del control de las concentraciones de los materiales, la temperatura y el pH en el baño de reacción. Esta técnica permite obtener peliculas delgadas policristalinas de compuestos semiconductores de los grupos II y VI de la tabla periódica. En el presente trabajo, se crecieron películas delgadas del material sulfuro de cadmio (CdS), por la tecnica de DBQ Este semiconductor posee una banda prohibida de 2.4 (eV) a temperatura ambiente, y puede cristalizar en la forma cúbica y hexagonal. El poseer este ancho de banda prohibida lo perfila como un buen candidato para ser material base en la fabricación de dispositivos optoelectrónicos, celdas solares, láseres o transistores de película delgada. Como una continuación al trabajo de caracterización del CdS crecido por la técnica de DBQ que realiza el IFUAP, y con el fin de dar respuesta a algunas interrogantes, nace la motivación de este trabajo, mediante el cual se plantea realizar un estudio sistemático del efecto que tiene la variación de la relación Cd/S sobre la morfologia, composición química de la película delgada, la transmitancia, la fotoconductividad y la fotoluminiscencia de este material semiconductor. Para la caracterización de este material semiconductor se utilizaron técnicas de análisis no destructivas, como son la microscopía electrónica de barrido (SEM), la espectroscopía de energia dispersada (EDS), la fotoconductividad, la transmitancia, así como la fotoluminiscencia. El orden que sigue este trabajo es el siguiente: En el Capítulo 1, se presenta una introducción sobre la importancia de los semiconductores formados por los grupos II y VI de la Tabla Periódica de los Elementos, y en particular la del CdS, así como sus aplicaciones tecnológicas y la técnica de crecimiento. Se presenta además, una descripción de los principios Básicos de las técnicas de caracterización. En el Capítulo 2, se describe el dispositivo experimental utilizado para el crecimiento de estas películas, así también, los dispositivos experimentales utilizados en las diferentes técnicas de caracterización de estas peliculas, y los resultados experimentales obtenidos en ellos. Finalmente, en el capítulo 3, se presenta la discusión de los resultados experimentales obtenidos, y se dan algunas conclusiones.
Fabricacion y caracterizacion de contactos ohmicos y oxidos anodicos en GaSb
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 1999) Lopez Gayou, Valetin; Herrera Perez, Jose Luis
Historicamente, la investigación en materiales semiconductores del grupo III-V ha estado gobernada por el desarrollo de sistemas de comunicación óptica, donde se requieren fuentes y detectores de luz que trabajen en la región de menos pérdida óptica Esto a creado la necesidad de buscar nuevos materiales para la fabricación de dispositivos que operen en los diferentes rangos del espectro óptico. Entre los compuestos semiconductores III-V, el antimoniuro de galio (GaSb) es particularmente interesante como substrato, porque su parámetro de red se puede acoplar a soluciones sólidas de varios componentes ternarios y cuaternarios de aleaciones III-V. éstas aleaciones tienen banda de energia prohibida en el rango de -0.3 a 1.58 eV, ie., 0.8-4.3um, como se representa en la figura 1. La detección a longitudes de onda mayores entre 8 y 14µm es posible con absorción interbanda en superredes basadas en antimoniuro Desde el punto de vista de dispositivos, estructuras crecidas con base en GaSb se han aplicado exitosamente en diodos láseres con baja corriente de umbral, en fotodetectores con alta eficiencia cuantica, en dispositivos de alta frecuencia, y en arreglos de celdas solares de alta eficiencia termofotovoltaica También es interesante el mejoramiento en la relación señal-a- ruido en 2>1.3µm en los fotodetectores de avalancha de GaAlSb crecido sobre GaSb Debido a que el GaSb tiene una movilidad electrónica mayor que el GaAs tiene un gran potencial para fabricar dispositivos en la región de microondas. Comparado con otros compuestos III-V, tales como GaAs, InSb, InP, y GaP, los aspectos tecnológicos del GaSb, han sido poco estudiados. Actualmente la tecnología del GaSb se enfoca en areas del crecimiento de materiales de alta calidad y en la mejor comprensión de las propiedades electrónicas y fotónicas, asi como en los procesos de fabricación de estructuras de dispositivos. En este trabajo nos enfocamos a dos partes importantes del proceso de fabricación de dispositivos optoelectrónicos y estas son 1) la formación de contactos ohmicos de baja resistividad y 2) La pasivación superficial En el caso de los contactos estos son una parte medular y de mucho interes, ya que, todo dispositivo semiconductor necesariamente debe contar con estos, para su comunicación con el mundo exterior Estos han sido exhaustivamente estudiados desde la fabricación del primer contacto metal-semiconductor hecha por Braun en 1874, y desarrollándose una teoria para explicar el comportamiento de dichas uniones, siendo Schottky, Richarson, Bethe), Fowler, Wilson, Spenke y Bardeen, los principales iniciadores de tal teoria, la que posteriormente fue modificada debido a dos necesidades importantes que son 1) El desarrollo del proceso planar para transistores bipolares y de efecto de campo, que condujo a mejorar el proceso de fabricación en contactos metal-semiconductor 2) La necesidad de dispositivos de alta frecuencia que estén libres de las inherentes limitaciones de velocidad asociadas con el almacenamiento de portadores minoritarios en el dispositivo de unión PN Introducción Al analizar los dos factores anteriormente citados, el requisito de contactos ohmicos en transistores de Si y Ge, fué simplemente sencillo, pero la necesidad de dispositivos de alta velocidad con geometrias menores y mas complejas, demandan contactos con un buen funcionamiento Además, el uso de nuevos materiales, tales como GaAs, GaP, AlAs, GaSb, InP y mezclas de estos materiales, presentan nuevos problemas respecto a la tecnologia de fabricación de dichos contactos, por lo que se requiere hacer un análisis mas profundo de los contactos en estos materiales. En el caso del estudio de la pasivación superficial, es otro punto importante, ya que estudios previos revelan que la fabricación de dispositivos crecidos en GaSb exhiben, una alta corriente de fuga, debido a la alta densidad de estados, lo que para un dispositivo se traduce en perdidas, tanto desde el punto de vista eléctrico como óptico, por ello la pasivación es un proceso usado para aumentar la eficiencia: además de proteger al dispositivo del medio ambiente. por lo que también, se necesita que la pasivación permanezca quimicamente estable. En trabajos previos17) se han realizado diferentes tratamientos quimicos, en nuestro caso emplearemos el proceso de oxidación anódica 19,2021,22,23.34), por lo cual, estudiamos los óxidos desde un punto de vista eléctrico, mediante un analisis corriente vs voltaje (I-V) y Capacitancia vs Voltaje (C-V) que nos proporciona información sobre la resistencia del óxido y su estructura Nuestro trabajo se desarrollara bajo la siguiente temática. En el capitulo 1 describimos teóricamente la unión metal-semiconductor, resumimos los principales mecanismos de transporte eléctrico en esta interface, y hacemos una breve descripción del proceso de pasivación. En el capitulo 2 describimos las diferentes técnicas de fabricación de los contactos eléctricos y las técnicas de caracterización tanto de los contactos eléctricos, como de la estructura MOS En el capitulo 3 se describe el arreglo experimental que usamos para obtener nuestros contactos eléctricos y la caracterización de nuestras dos estructuras En el capitulo 4 analizamos de los resultados obtenidos y hacemos una discusión de ellos.
Diseño de un modelo experimental para evaluar los daños generados por la exposicion a la inhalacion de ceniza volcania
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2000) Rivera Tapia, Jose Antonio; Cedillo Ramirez, Lilia
Hoy en día existen demandas como resultados del desarrollo, lo cual refleja un aumento en la tasa de mortalidad por enfermedades de diversos tipos, así como otros padecimientos originados por el deterioro ecológico producido por la actividad humana o por factores naturales. En relación a lo anterior se sugiere identificar los riesgos ambientales, tanto para los ecosistemas y la salud pública, en base al traslado, degradación, acumulación e interacción de los diversos contaminantes. La actividad del Popocatépetl no ha significado aún un riesgo en relación a destrucción física, pero las emanaciones de gases y cenizas pueden llegar a deteriorar el ambiente y el estado de la salud en la población que habita en las cercanías al volcán Si consideramos que las enfermedades pueden aparecer como resultado del sinergismo entre un factor químico y biológico es recomendable estudiar dichas relaciones, ya que recientemente se han aislado diversas cepas de Mycoplasma fermentans en tracto respiratorio donde se observa colonización e infección de las células epiteliales del hospedero El modelo experimental consistió en la exposición de los hämsters, tanto en condiciones de laboratorio y en campo, a la inhalación de ceniza volcánica proveniente del Popocatépetl, además se indujo una infección previa con Mycoplasma fermentans en tracto respiratorio, durante un periodo de sesenta días. Los resultados obtenidos bajo condiciones de laboratorio presentan cambios más marcados en lo que respecta a las lesiones del tejido pulmonar, caracterizándose por la presencia de focos inflamatorios, infiltración de células plasmáticas y neutrófilos, además de cambios en la estructura del tejido. El reaislamiento de Mycoplasma fermentans presentó mayor frecuencia a partir de las biopsias de traquea y pulmón con respecto al modelo que estuvo bajo condiciones de campo.
Uso de los pseudopotenciales en ERMLER, ROSS Y CHRISTIANSEN en algunos compuestos de actinidos
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2000) Chigo Anota, Ernesto; Rivas Silva, J.F
El tratamiento atómico de los elementos pesados, así como los cálculos moleculares que envuelven átomos de este tipo es bastante complejo desde el punto de vista teórico y práctico. La razón principal es el gran número de electrones que estos sistemas contienen, así como la necesidad de involucrar en su estudio efectos que no son necesarios para el caso de átomos más livianos: el acoplamiento espín-órbita y especialmente los efectos relativistas. Esto debe ser tomado en cuenta desarrollando una teoría atómica y molecular suficiente, como se cita en la literatura, donde aparecen métodos basados en el campo autoconsistente (SCF) y su extensión a efectos relativistas llamado HFD & Hartree-Fock-Dirac. En esa extensión se desarrolla una metodología para resolver la ecuación de Dirac para un sistema de muchos electrones suponiendo un potencial Coulombiano central. Desde el punto de vista práctico se han desarrollado programas computacionales que llevan a cabo estos métodos y que pueden ser utilizados dependiendo de los intereses y la precisión que requiera el usuario. El tratamiento de un átomo pesado por ejemplo, tomando en cuenta todos sus electrones, implica resolver la ecuación de Dirac para mas de 70 electrones. Esto es suficientemente complejo aún para las actuales computadoras. Desde el principio de la teoría cuántica se buscó la manera de hacer un cálculo que no trabajara con todos los electrones, tratándose de quedar solamente con las llamados electrones de valencia, sustituyendo los electrones del core de una manera apropiada, tal que tome en cuenta solamente su interacción principal. El objetivo general de este trabajo es el de mostrar la utilidad del uso de la teoria de pseudopotenciales en el cálculo de propiedades moleculares. Estas ideas datan de Hellmann (1935) y Fock (1940), aunque fueron Phillips y Kleinman (1935) quienes propusieron la idea de los llamados potenciales efectivos. Posteriormente Weeks, Goddar (1968) y recientemente Hay, Wadt (1978, 1991) y Ermler, Ross y Christiansen han desarrollado técnicas para estos pseudopotenciales relativistas que permiten realizar cálculos con los átomos pesados mas adecuadamente. Por ello, en este trabajo: A) En el primer capítulo se presenta tanto la teoría desarrollada por Hartree para los cálculos en sistemas polielectrónicos, como las contribuciones hechas por Fock, y además se incluye el tratamiento de sistemas moleculares. B) Se hace una monografia de la teoría de pseudopotenciales y bases desarrolladas en la literatura haciendo una breve exposición de la teoría atómica y molecular a nivel de cálculos relativistas HFD, como se muestra en el capítulo 2. C) En el tercer capítulo se presenta la teoría del hamiltoniano efectivo y pseudopotenciales desarrollada por Hellmann. D) Se proponen casos de prueba en moléculas y sólidos donde se explica la manera de implementar esa teoría, y cuyos resultados son mostrados en el capítulo 4. Junto con ello se hace un resumen de los trabajos de Ermler, Ross, y Christiansen (ERC). como exponentes importantes de la teoría de pseudopotenciales desarrollados para toda la tabla periódica, como se muestra en el capítulo 4 también. E) Finalmente se realizan cálculos aproximados de propiedades (absorción y emisión) de los sistemas propuestos, analizando su calidad al compararse con datos experimentales y con datos provenientes de otra clase de cálculos.
Identificacion del gen estructural IngA del Pilus Longus en cepas tipo y clinicas de Escherichia coli Enterotoxigenica
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2000) Gutierrez Cazarez, Zita; Giron Ortiz, Jorge A.
Escherichia coli enterotoxigénica (ETEC) es la principal causa bacteriana de diarrea aguda en niños menores de 5 años, y en turistas que viajan a zonas menos desarrolladas. Esta bacteria expresa distintos factores de colonización (CFs), los cuales favorecen la colonización del intestino mediante el reconocimiento de receptores en la mucosa intestinal. Algunas cepas humanas de ETEC también expresan un pilus tipo IV denominado longus, codificado en un plásmido de alto peso molecular en asociación con otros CFs y enterotoxinas. En este trabajo, desarrollamos una reacción de PCR para la identificación de cepas de ETEC, basada en la detección de la secuencia nucleotídica de IngA, el gen estructural de longus. Para ello se diseñaron oligonucleótidos específicos, que amplificaron un fragmento de 630 bp en ocho cepas prototipo previamente caracterizadas como longus positivas. Las cepas de ETEC que expresan CFA/III (un pilus tipo IV), también fueron positivas por PCR, confirmando la homología entre CFA/III y longus. Ninguna de las cepas no-ETEC y cepas de enteropatógenos diferentes a E. coli estudiadas amplificaron IngA, lo que demuestra que esta reacción detecta solamente cepas de ETEC que contienen los genes para la expresión de pili tipo IV, incluyendo longus y CFA/III. A excepción de cinco cepas PCR-IngA-positivas que hibridaron con la sonda de IngA, todas las cepas PCR-IngA-positivas expresaron longus. La técnica de PCR se aplicó en una colección de 264 cepas de E. coli aisladas de 88 niños Mexicanos con diarrea, IngA se encontró en 30 cepas aisladas de 24 (27%) de los 88 niños con diarrea. Conjuntamente, el método de PCR-ingA, las sondas de DNA y la reacción de PCR para la detección de genes de las enterotoxinas, pueden ser herramientas útiles en la detección de cepas de ETEC que contienen genes para la expresión de pili tipo IV en estudios epidemiológicos.
Estudios de degradacion fotoquimica de compuestos organoclorados en presencia de catalizadores zeoliticos
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2000) Perez Osorio, Gabriela; Hernandez E, Miguel Angel; Campos Reales, C Eduardo
Los hidrocarburos clorados o compuestos organoclorados, representan un reto para la protección ambiental. La aplicación de tecnologías convencionales de tratamiento de aguas resulta inadecuada para eliminar a este tipo de compuestos. Por lo que se ha recurrido a la aplicación de métodos fotoquímicos y catalíticos para tal propósito. Lo anterior representa una amplia posibilidad de aplicación para las zeolitas. La presente investigación busca llevar a cabo un proceso foto-oxidativo con catálisis heterogénea usando: luz UV para iniciar una serie de reacciones oxidativas, y catalizadores zeoliticos que favorezcan el proceso de degradación de los hidrocarburos clorados en medio acuoso. El capítulo I, presenta los antecedentes del trabajo. Los hidrocarburos clorados o compuestos organoclorados son altamente tóxicos, se acumulan en los tejidos grasos de los animales y son muy estables. Estas propiedades los hacen altamente contaminantes, dañinos principalmente para la salud humana y la calidad de las aguas; lo anterior ha motivado el desarrollo de tecnologias especiales de descontaminación. La introducción de la luz UV a los procesos de descontaminación surge cuando se descubre su efecto bactericida. Iniciando así, su aplicación en procesos de purificación de agua, para después ampliar su campo de aplicación en el área ambiental. Actualmente, la luz UV es comúnmente utilizada en procesos de degradación por foto-oxidación de contaminantes en fase acuosa y gaseosa. Las zeolitas juegan un papel importante como el de la aplicación de la luz UV, ya que es parte complementaria de los procesos propuestos para la degradación de los contaminantes organoclorados. Aquí se presenta como ha sido la participación de las zeolitas en diferentes procesos catalíticos, así como la importancia de la catálisis no solo en el área industrial sino también en el área ambiental. En el capítulo II, se hace referencia a las propiedades de adsorción y de catálisis de las zeolitas, que ofrecen la posibilidad de aplicarlas en el área ambiental y particularmente para los objetivos de este trabajo. Entre estas propiedades destacan la selectividad geométrica o de forma, que depende del tamaño y forma de los poros y cavidades de la estructura de las zeolitas. La presencia de sitios ácidos también representa una importante propiedad desde el punto de vista catalítico. Además, se mencionan los diferentes procesos existentes que combinan métodos catalíticos y fotoquímicos para la degradación de compuestos organoclorados, en especial se describen los aqui utilizados. La parte experimental de este trabajo se describe en el capítulo III. Esta abarca la preparación de las muestras zeolíticas naturales (molturado y tamizado), la caracterización estructural: por espectrometría de absorción atómica (AA) se determinó la composición química de los materiales utilizados; por difracción de rayos X (DRX) se identificó la fase mayoritaria; y por cromatografia de gases (CG) se determinó la capacidad de adsorción de las muestras; la preparación de los catalizadores zeolíticos (ácidos y catiónicos), la realización de las pruebas de degradación fotoquímica, así como los análisis de cromatografia posteriores. Los catalizadores ácidos, se prepararon a partir de Zeolitas Naturales Mexicanas (ZNM), del tipo Clinoptilolita (ZNM-17 y ZNM-16), Natrolita (ZNM-6), y Erionita (ZAPS-1), mediante el procedimiento por contacto con solución de HCl. Para preparar los catalizadores zeolíticos catiónicos, se utilizaron sólo Clinoptilolita (ZNM-16) y Erionita (ZAPS-1), estas se intercambiaron por contacto con una solución salina de los cationes: Ag+, Cu2+, Fe2+, Ni²; previo tratamiento ácido con solución de HCl para eliminar impurezas de los materiales. Para simular agua contaminada se preparó una solución acuosa de clorobenceno, el cual fue tomado como compuesto modelo. Las pruebas se realizaron en un reactor de cuarzo, con agitación constante y para el seguimiento del proceso se utilizó un espectrofotómetro UV. Como fuente de luz UV se utilizó una lámpara de vapor de Hg (HBO 500). Además, se emplearon TiO2 como semiconductor y H2O2 como agente oxidante, con el fin de comparar el efecto tanto individual como sinérgico durante el proceso de fotodegradación catalítica. Al cabo de estas pruebas se realizaron análisis de cromatografía de gases de las soluciones finales para observar el cambio en la concentración del clorobenceno y determinar así el grado de disminución o degradación. El capítulo IV presenta los resultados de las pruebas de degradación, los cuales se evaluaron con respecto a los cambios que presentó el espectro de absorción UV de la solución acuosa de clorobenceno, observando: ningún cambio, ligero, notable y más notable o total. En general, las pruebas que presentaron más cambios notables, se manifestaron al aplicar luz UV, el catalizador zeolítico y el H2O2. Tal efecto también se observa en los análisis de cromatografia de gases, lo permite concluir que el proceso ha llevado a la degradación del compuesto original a productos todavía no identificados. Finalmente, el capítulo V hace referencia a las conclusiones que llevó la realización de este trabajo. Se determinó que el sistema que presenta una mayor degradación del clorobenceno, es el que utiliza peróxido de hidrógeno, seguido por el de dióxido de titanio. Comparando la participación de dos de los catalizadores Cu² ZNM-16 y Cu²+ZAPS-1, se determinó que el preparado a partir de ZAPS-1 mejoró notablemente el proceso de fotodegradación del clorobenceno. Así, se confirma el hecho de que las zeolitas representan una posibilidad cada vez mayor de ser empleadas en el área de control ambiental, principalmente en el desarrollo de técnicas de tratamiento de aguas contaminadas con compuestos organoclorados. El apéndice A contiene todos los espectros de absorción UV obtenidos de las pruebas de fotodegradación del clorobenceno, para cada catalizador zeolítico preparado con cada uno de los sistemas propuestos.
Diseño y construcción de un equipo portatil para pruebas de saturación y polaridad a transformadores de instrumento
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2000) Martínez Rodríguez, Lucio; Fueyo Mac Donald, M. A. Nicolás; Morán Ramírez, Carlos
Los sistemas eléctricos de potencia están constituidos básicamente de Generadores, Transformadores, Buses y Líneas de Transmisión, cuyo objetivo fundamental es generar, transmitir y distribuir la energía eléctrica a los usuarios con calidad y cantidad suficientes en voltaje y frecuencia. Para poder controlar, medir y proteger estos sistemas de potencia se requiere contar con equipos de protección, medición, registro y control que para poder conectarlos al sistema de potencia en Alta Tensión se requiere del uso de transformadores de instrumento que permiten aislar estos equipos entre el primario y secundario poniendo el aislamiento para poder medir el voltaje y corriente en Alta Tensión. Como el sistema de potencia es trifásico se requiere el uso de tres transformadores de corriente uno para cada fase, así como de tres transformadores de potencial, lo que hace que en una Subestación eléctrica se cuente con una gran cantidad de transformadores de instrumento y es por esto la importancia de conocerlos así como de saber probarlos y determinar su estado de operación. En esta tesis se plantea en el primer capítulo qué son las Subestaciones Eléctricas, con sus características de operación, así como los elementos que la integran con sus características en condiciones normales y de falta. Luego se describen las pruebas de campo que deben realizarse a los transformadores de instrumento, describiéndose los procedimientos para cada prueba. De aquí se deriva la necesidad de proyectar un Equipo Portátil para Pruebas a transformadores de Instrumento con el objetivo de optimizar el tiempo en que se realiza cada prueba, así como el evitar errores sistemáticos. También se plantea el ahorro que se tiene con el nuevo equipo al disminuir las horas / hombre para poder probar los transformadores de instrumento. Se describen las partes que constituyen el equipo portátil para pruebas a transformadores de instrumento, los diagramas eléctricos y su método de operación. Finalmente se concluye la tesis con la construcción del prototipo del Equipo Portátil para Pruebas a Transformadores de instrumento.
Efectos de los reguladores globales IHF Y H-Ns sobre la expresion de genes de rulencia de Escherichia coli enteropatogena (EPEC)
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2001) Morales Vazquez, Claudia Dalia; Bustamante Santillan, Victor; Arenas Hernandez, Margarita Maria de la Paz; Martinez Laguna, Ygnacio
Eschericha coli enteropatógena (EPEC), es un importante agente etiológico de diarrea infantil, que provoca una lesión característica sobre la célula hospedera intestinal. Los genes requeridos para esta lesión histopatológica característica de EPEC sobre la célula hospedera se encuentran localizados en el plásmido EAF y la isla de patogenicidad LEE en el cromosoma de EPEC. La expresión de los genes de virulencia es modulada por parámetros ambientales y fisiológicos y es regulada positivamente a nivel transcripcional por los reguladores específicos PerA(BfpT), el cual se encuentra codificado en el pEAF y Ler codificado en el primer operón de la isla de patogenicidad LEE. En este estudio determinamos el efecto de los reguladores globales IHF y H-NS sobre la expresión de algunos de los genes de virulencia de EPEC. Analizanmos la expresión de fusiones transcripcionales al gen reportero cat de los genes sepL, espA, escD, bfpA y perA(bfpT) en una mutante de E. coli K-12 H-NS, así como en una mutante de EPEC IHF obtenida por reemplazamiento alélico. Nuestros resultados indicaron que H-NS actúa como represor del operón LEE4 (sepl y espABD), y que este efecto es abolido por el regulador Ler. Dado que este regulador presenta homología con la familia H-NS, nuestros datos sugirien que Ler actúa como un anti-represor, al competir con H-NS por los sitios de unión en las regiones reguladoras de los genes blanco. Por otra parte, la expresión de sept y espA requiere del regulador IHF, efecto que puede estar mediado por Ler, ya que la expresión de este regulador también requiere de IHF. Ademas, IHF también regula positivamente la expresión de bfpA pero no tiene efecto sobre perA(bfpT) sugiriendo que IHF puede estar actuando como corregulador junto a PerA(BfpT) uniéndose a la región reguladora de bfpA. Estos datos nos indican que IHF, H-NS, Ler y PerA(BfpT) participan coordinadamente en la regulación de la expresión de los factores de virulencia de EPEC.
Restauracion de suelos contaminados por hidrocarburos utilizando oxidantes quimicos
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2001) Gonzalez Araoz, Martha Patrcia; Teutli Leon, Mayra M.; Fueyo Macdonald, Nicolas
Las actividades humanas han modificado radicalmente la cobertura natural del planeta Entre los muchos factores que han dañado la superficie terrestre se hallan: la destrucción indiscriminada de bosques y selvas, la sobreexplotación de aquellos suelos que se han dedicado a la ganaderia y al cultivo de granos de un solo tipo, así como la contaminación por compuestos xenobióticos. Todos estos procesos han dado como resultado la degradación extensiva de los suelos. La industrialización ha generado una gama extensa de productos quimicos y asimismo se ha incrementado la producción mundial de desechos, muchos de los cuales son considerados peligrosos. Dado que todo producto químico tiene cierto grado de toxicidad a los seres vivos, el incremento en las enfermedades degenerativas, como el cáncer, se atribuye a la sobreexposición de la gente a los productos químicos. El petróleo, por su diversidad de componentes es uno de los productos que más incidencia tiene en daños a la salud. La contaminación de suelos y agua por actividades relacionadas con la industria petrolera se ha convertido en un problema grave por los residuos peligrosos que genera. Debido a la complejidad en su composición química asi como a la magnitud de producto esparcido, los derrames de este producto han creado graves problemas ecológicos en los sitios de explotación, refinación y almacenamiento de hidrocarburos. Es importante destacar que los productos de petróleo refinado llegan a causar contaminación cuando, después de utilizados, no se les da el tratamiento adecuado para su disposición final. En México, los datos precisos de lugares afectados por derrames de hidrocarburos son escasos, lo cual da una probabilidad muy baja de que se estime adecuadamente la magnitud del impacto ejercido contra el medio ambiente A medida que se van conociendo los efectos adversos en el medio y la salud. crece el interés por desarrollar e implententar tecnologias innovadoras para la restauración de sitios contaminados. En el tratamiento de suelos contaminados por hidrocarburos las tecnologias aplicadas incluyen: excavación y confinamiento, extracción con vapor, estabilización y solidificación, lavado de suelos, quemado, precipitación química. vitrificación, desorción termica e incineración. La aplicación de estas tecnologias llegan a manejar costos muy altos en alguna etapa, ya sea porque utilizan reactivos/maquinaria may cara, o son procesos que requieren largos tiempos de tratamiento. Por esa razón, algunas gentes han visto como alternativa más económica el uso de la bioremediación. El término bioremediación es utilizado para describir los diferentes procesos microbianos, como la mineralización y el cometabolismo/activación, en los cuales los compuestos orgánicos son degradados por la acción de microorganismos. La bioremediación engloba las técnicas de saneamiento de suelos y cuerpos de agua, que utilizan organismos vivos o sus enzimas para transformar y/o degradar bioquimicamente los contaminantes hasta concentraciones que no produzcan, a corto largo plazo, efectos nocivos a la salud o al ambiente en general. Sin embargo, la mayor limitante para obtener altas eficiencias en la bioremediación es la concentración de los hidrocarburos. Concentración que, en la mayoría de los casos, excede el limite superior del rango de concentración que garantiza la sobrevivencia de los microorganismes. Por esa razón, la comunidad cientifica ha dirigido sus esfuerzos a utilizar los oxidantes con el propósito de escindir los hidrocarburos, produciendo cadenas más pequeñas con lo cual se facilita la actividad microbial y se logra disminuir la concentración de hidrocarburos acelerando la restauración de los sítios.
Relacion de las bacterias presentes en el aire con las causantes de infecciones respiratorias en alumnos de dos preparatorias en la cuidad de Puebla
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2001) Avelino Flores, Fabiola; Cedillo Ramirez, Lilia; Gil Juarez, Constantino
El objetivo del presente trabajo fue establecer la posible relación entre las infecciones respiratorias y los microorganismos recuperados del aire y observar la variación estacional en la cuenta y tipo de microorganismos presentes en el aire. Se monitoreó la ciudad de Puebla en cinco diferentes puntos entre Agosto de 1999 y Agosto del 2000, el tiempo de muestreo se dividió tomando en cuenta las estaciones del año. El muestreo del aire fue a placa abierta a una altura de entre 1.5-2.0 metros, el tiempo de muestreo fue de 10 minutos para los medios de agar gelosa sangre de carnero al 5% y agar de infusión cerebro-corazón, y de 45 minutos para los medios de agar Mac Conkey, agar tergitol, agar eosina y azul de metileno, agar sal y manitol, caldo Todd Hewit y caldo tripticaseina y fosfato, las muestras se incubaron durante 48 horas a 37°C y se realizó el recuento de unidades formadoras de colonias (UFC) y la identificación de las cepas sospechosas de ser patógenas se realizó por pruebas bioquimicas. Se invitó a los alumnos de dos escuelas preparatorias cercanas a los sitios de monitoreo del aire y se les realizó un cultivo de exudado faringeo y una encuesta para conocer que factores ambientales podrian estar relacionados con las infecciones respiratorias. A las bacterias aisladas del aire y de los exudados faringeos se les realizó la prueba de susceptibilidad a antimicrobianos por el método de Bauer-Kirby. El recuento de UFC fue más alto para la zona norte durante el tiempo de muestreo. excepto en primavera; en verano los recuentos de UFC fueron los más bajos, pero se aislaron en mayor cantidad y más frecuentemente los géneros bacterianos de Interés para el estudio (Staphylococcus sp. Streptococcus sp y Klebsiella sp). Las bacterias recuperadas del aire con mayor frecuencia fueron Staphylococcus aureus coagulasa positiva (C+), Streptococcus B-hemoliticos del grupo A, S pneumoniae y algunas especies de enterobacterias entre ellas Klebsiella pneumoniae, Serratia sp, Hafnia sp y Enterobacter sp. En el grupo estudiantil las especies recuperadas con mayor frecuencia fueron S. aureus C+, Streptococcus ẞ-hemoliticos del grupo A y Klebsiella pneumoniae. Las cepas de enterobacterias recuperadas del aire y del grupo de alumnos mostraron mayor resistencia a ampicilina, carbenicilina y cefalotina, las cepas de Staphylococcus aureus C+ presentaron mayor resistencia a penicilina, ampicilina, ceftazidima, eritromicina y dicloxacilina. Las cepas ambientales presentaron mayor resistencia a antibióticos que las provenientes de la población estudiantil, algunas de las cuales podrian estar relacionadas debido a que presentan un perfil de resistencia semejante.
Patrones de expresion de la caña de azucar cuando es colonizada por Gluconacetobacter diazotrophicus
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2001) Velazquez Hernandez, Maria de Lourdes; Valdez Alarcon, Juan Jose
En las interacciones planta-microorganismo se conoce muy poco acerca de los genes que expresa la planta y mucho menos en la interacción G. diazotrophicus y la caña de azúcar. Así que realizamos una búsqueda de patrones de expresión diferencial cuando la caña de azúcar es colonizada por G. diazotrophicus. Este endofito se transmite de generación en generación en la planta por la propagación vegetativa de la caña de azúcar, por esto era necesario obtener plántulas axénicas y para evitar variaciones somaclonales se utilizó el cultivo de meristemos apicales de las variedades MEX 57- 473 y MY 55-14 con la subsecuente obtención de brotes. Las plántulas axénicas solo se obtuvieron de la variedad MEX 57-473, obteniendo mejores rendimientos que los reportados. Las plántulas axénicas fueron inoculadas con G. diazotrophicus en condiciones deficientes de fuente de carbono (para la bacteria) y de fuente de nitrógeno (asimilable para la planta). La primera cinética de infección se realizó de 1 a 15 dias, se analizaron muestras de 1, 5, 10 y 15 días de post-infección, se observó que la colonización se llevo a cabo conforme a lo ya reportado. La segunda cinética de infección fue de 24 horas, analizando muestras a las 4, 8, 12 y 24 horas post-infección, se extrajeron los ARN totales de estos tiempos para utilizarlos en el método de cDNA AFLP. El método para el estudio del transcriptoma de la caña de azúcar fue el cDNA AFLP, porque este es recomendado para genomas complejos, un método reproducible y relativamente sencillo para este tipo de estudios. Nosotros utilizamos enzimas de restricción diferentes a las reportadas por otros autores, las cuales se eligieron analizando que enzimas de restricción digerian los ADNc reportados, buscamos enzimas de corte cohesivo que reconocian 4 pares de bases (enzima de corte frecuente) y enzimas que reconocen 6 pares de bases (enzima de corte raro), elegimos Taq 1 y Bgl II, porque el 21% de los ADNc analizados eran cortados por ambas enzimas generando fragmentos de 100 a 500 pb, un extremo se generó por Taq I (enzima de corte raro) y el otro extremo por Bgl II (enzima de corte frecuente). Nosotros estandarizamos el método de cDNA AFLP para la caña de azúcar cuando es inoculada con G. diazotrophicus a las 4, 8, 12 y 24 horas post-infección, los patrones de expresión diferencial se analizaron en el ABI-Prism 310 Genetic Analyzer (Applied Biosystems) utilizando oligonucleotidos iniciadores de amplificación selectiva de Bgl II marcados con fluorocromo, esto permitió visualizar con que combinaciones de bases extras en las amplificaciones selectivas obtenemos productos de expresión diferencial Los patrones mostraron que habia productos que aumentaba su expresión conforme pasaba el tiempo y otros productos tenían máximos de expresión a las 4 u 8 horas posteriores a la infección. La caña de azúcar posee un genoma complejo, por esta razón esperamos una gran cantidad de bandas en las amplificaciones selectivas, pero no fue asi, se obtuvieron un número reducido de bandas desde que se utilizó una base extra en las amplificaciones selectivas.
Analisis del papel de los flavonoides en la colinizacion de frijol por Gluconacetobacter diazotrophicus
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2001) Trujillo Lopez, Maria Alejandra; Cano Camacho, Horacio; Trujillo Lopez, Maria Alejandra
La colonización ha mostrado ser un factor importante en el establecimiento de la interacción entre bacterias potencialmente benéficas a plantas. Estudios recientes de bacterias diazotroficas dan importantes contribuciones a extender la FBN a otros tipos de cultivo diferentes a plantas leguminosas. Este tipo de interacciones se establecen en respuesta a múltiples señales reguladoras, de los cuales los flavonoides han mostrado ser señales comunes necesarias para el establecimiento de las interacciones planta- microorganismo. Los flavonoides son liberados por la raiz e influyen en la expresión de genes bacterianos, en la quimiotaxis, en la prevención de la distribución de patógenos, asi como, en la promoción de la colonización. Dado a que nosotros estamos interesados en identificar factores potenciales involucrados en la interacción primaria planta diazótrofo, analizamos la capacidad de Gluconacetobacter diazotrophicus (un endófito de caña de azúcar) a responder a estos metabolitos. Para asegurar la posibilidad de que G diazotrophicus pudiera responder a estos químicos producidos por las raices, nosotros inducimos la producción de flavonoides en las plántulas de frijol común por estrés con luz UV, e infectamos con el diazótrofo. En este trabajo, nosotros reportamos cambios cualitativos y cuantitativos en la adherencia de la bacteria a las raíces de las plántulas tratadas con luz UV, también mostramos resultados de al menos 1 compuesto flavonoide, aislado de las raíces de plántulas de frijol irradiadas con luz UV con un efecto positivo sobre la colonización, además del papel de flavonoides estándares naringenina y daidzeina como inductores de la colonización en este sistema de estudio.
Preparacion y caracterizacion de Nanocompositos de Ge/ZnO
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2002) Casarrubias Segura, Gildardo; Zarate Corona, Oscar; Pal Umapada
El propósito de este trabajo es preparar nuevos nanocompósitos de Ge/ZnO (Ge incorporado a una matriz ZnO) empleando la técnica de "sputtering r.f.". Para la caracterización estructural se usaran las técnicas de Microscopía Electrónica de Transmisión (TEM) y Difracción de Rayos-X (XRD) y para la caracterización óptica las técnicas de Absorción Óptica UV-Vis y Espectroscopía Raman. De esta manera, en el capítulo 1 se describirán los conceptos fundamentales de las peliculas compósitos, así como algunas de sus aplicaciones; en el capítulo 2 se describe la preparación de las películas compósitas mediante la técnica sputtering r.f. y las condiciones de crecimiento; en el capítulo 3 se analiza estructuralmente las películas compósitas mediante las técnicas XRD y TEM, se obtienen los tamaños promedios de las partículas de ZnO y de Ge; en el capítulo 4 y 5 se analizan los resultados de la espectroscopia de absorción UV-Vis y Espectroscopía Raman, respectivamente.
Busqueda del degradosoma de RNA de Bacillus subtillis
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2002) Cordova Arias, Israel; Vazquez Cruz, Candelario; Olmedo Alvarez, Gabriela
La estabilidad del RNA mensajero (mRNA) es un medio importante por el cual la expresión del gen es controlada. Muchos de los trabajos sobre el recambio del mRNA en bacterias se ha hecho en Escherichia coli, y poco es conocido acerca de su degradación en B. subtilis (Vázquez-Cruz y Olmedo-Alvarez, 1997). Se han hecho importantes avances en los pasados 10 años con la caracterización de elementos en el RNA que actúan en cis y de proteinas celulares que actúan en trans para el control del decaimiento del mRNA. En E. coli se han descrito principalmente cuatro ribonucleasas: dos endonucleasas (RNasa E y RNasa III) y dos exonucleasas (polinucleótido fosforilasa o PNPasa y RNasa II) con actividad 3'->5". Adicionalmente se ha descrito la participación de la poli(A) polimerasa (Grunberg-Manago, 1999). La RNasa E y la PNPasa se encuentran en un complejo multienzimático llamado degradosoma. En este complejo se incluye a la RNasa E, PNPasa, una helicasa dependiente de ATP (RhIB) miembro de la familia DEAD, y la enolasa, que es una enzima glicolitica (Py y cols., 1994). También hay proteínas adicionales asociadas a este complejo como proteinas de choque térmico, las chaperonas GroEL y Dnak, y la polifosfato cinasa, cuyo papel dentro del degradosoma es desconocido. En un estudio hecho en B. subtilis por Bechhofer en 1998 se reportó el primer análisis de la deleción en el gen pnp, que codifica para la PNPasa, indicando que la degradación del mRNA no fue severamente afectada a pesar de que en otros reportes se aseveró que la PNPasa es la principal exoribonucleasa 3'- >5' (Bechhofer y Wang, 1998). En B. subtilis no se conoce un homólogo la RNasa E de E. coli, que además de ser la principal endoribonucleasa, es la proteína que ancia al resto de proteínas del degradosoma. De igual forma, no se conocen otras exonucleasas similares a las más importantes en E. coli. Debido a que hay poca información acerca de los mecanismos coordinados de degradación del RNA en B. subtilis, en principio es necesario identificar los genes de las proteinas que posiblemente participen en la degradación del mRNA, con el fin de tratar de esclarecer si en B. subtilis existe un degradosoma de mRNA similar al de E. coli. Por medio de PCR amplificamos las secuencias de los genes pnp y yqfr que codifican respectivamente para las proteínas PNPasa y la helicasa YqfR de B. subtilis. Esta última es homóloga a la helicasa RhiB de E. Coli (34% de identidad). Las secuencias se clonaron en el vector de expresión pTrcHisA. Ambas secuencias expresaron péptidos de 84 kDa para la proteína PNPasa y de 49.8 kDa para la proteína YqfR. Se secuenció la parte N- terminal de cada una de las proteínas y las secuencias obtenidas de las dos proteínas fueron idénticas a las reportadas en el banco de genes. Purificamos a las 2 proteínas por cromatografía en columnas de níquel y se analizó la interacción de estas proteínas con extractos de B. subtilis crecidos a 30 y 37°C y también bajo un gradiente de glicerol del 10, 20 y 30%. En el análisis de interacción de proteínas PNPasa y YqfR hecho en este trabajo bajo ninguna condición se observó la presencia de alguna otra proteína asociada. De acuerdo con nuestros resultados es posible no exista el degradosoma en B. subtilis como el descrito en E. coli.
Estudios sobre la regulacion transcripcional del GEN escD en Escherichia coli ENTEROPATOGENA
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2002) Martinez De La Peña, Claudia Fabiola; Bustamante Santillan, Victor; Martinez Laguna, Ygnacio
Escherichia coli enteropatógena (EPEC) pertenece a un grupo de patógenos entericos causantes de una lesión histopatológica característica de adherencia y destrucción ó lesión A/E ("Attaching and Effacing"). En esta lesión se observan cambios importantes en el citoesqueleto de la célula hospedera, los cuales incluyen la acumulación de actina polimerizada debajo del sitio de unión de la bacteria lo cual lleva a la formación de una estructura parecida a un pedestal. Los genes que se requieren para conferir el fenotipo A/E se localizan en una isla de patogenicidad de EPEC llamada región LEE, la cual está organizada genéticamente en por lo menos 5 operones principales. Entre los operones LEE4 y LEE5 se encuentra el gen esco, el cual se transcribe en forma divergente al operón LEE4 y cuyo producto forma, presumiblemente, parte del sistema de secreción tipo III de EPEC. La expresión de los factores de virulencia de EPEC está regulada por los reguladores transcripcionales Ler (LEE encoded regulator) y Per (Plasmid encoded regulator), así como por los reguladores globales H-NS e IHF. También se ha descrito que la expresión de estos factores de virulencia se modula por distintos parámetros ambientales. En el presente trabajo se localizó el sitio de inicio de la transcripción del gen escD, el cual se encontró a 58 pb a partir del codón de inicio, y corresponde a una A. Se propone la existencia de un posible promotor que corresponde a un hexámero-35 (TGTACA) y a un hexámero - 10 (TATTCT) dependiente del factor o". También se determinó que la región reguladora comprendida entre las posiciones -93 a-281, a partir del sitio de inicio de la transcripción, controla negativamente la expresión de escD. Además se observó que la expresión del gen escD es controlada positivamente por el regulador transcripcional Ler y negativamente por el regulador global H-NS. A este respecto, nosotros proponemos que pudiera estar actuando como desrepresor sobre el gen escD, como se ha determinado para los genes de los operones LEE2 y LEE3. Por otro lado, determinamos que la expresión de escD se reprime en medio LB y en presencia de altas concentraciones de Fe, de una manera similar a lo reportado para otros genes LEE. Sin embargo, en contraste a estos otros genes, la expresión de escD no se reprime en presencia de amonio ni por crecimiento a bajas temperaturas (29°C).
Bioindicadores de la contaminacion atmosferica de la cuidad de Puebla: Poblaciones Fungicas
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2002) Merino Guzman, Gloria; Espinoza Texis, Alejandra; Muñoz Garcia, Andres
El objetivo de este trabajo fue determinar en que zona de la ciudad de Puebla (Norte, Noreste, Centro, Sur y Sureste) se encuentra la mayor carga fúngica. Se realizó la identificación de hongos filamentosos y levaduras del género Candida. Los géneros de hongos filamentosos aislados corresponden a Aspergillus sp., Alternaria sp., Penicillium, Stachybotrys sp., Pythium sp., Curvularia sp., Fusarium sp., Ulocladium sp. Mucor sp.. Rhizopus sp., Cladosporium sp. Para el aire extramuros, la zona Norte fue la que presentó una mayor carga de hongos filamentosos con respecto a las otras cuatro zonas, mientras que en el aire intramuros la zona Sur fue la que presentó una mayor cantidad de propágulos. En el aire extramuros, el análisis estadístico realizado ANOVA (Kruskall-Wallis) no presento diferencia significa, mientras que para el aire intramuros se realizó la prueba ANOVA (Tukey-Kramer) sin presentarse tampoco diferencia significativa. A los diferentes géneros de hongos filamentosos aislados se les determinó su resistencia a metales pesados (Hg, Pb, Mn. Ni, Mo, V, Fe, Cu y Zn) a las concentraciones de 10, 25, 50, 100 y 200 ppm. Las especies de hongos levaduriformes aislados corresponden a Candida krusei (80%), Candida albicans (13.3%) y Candida glabrata (6.7%). Para el aire extramuros la zona Sur fue la que presentó mayor cantidad de UFC, además de obtenerse una diferencia significativa (ANOVA Tukey-Kramer, p<0.01) con las otras cuatro zonas, mientras que para el aire intramuros la zona Norte fue la más densamente poblada, obteniéndose una diferencia significativa (ANOVA Kruskall-Wallis, p<0.018). De las levaduras del género Candida, Candida albicans fue resistente a Fluconazol, con una mayor proporción que a Bifonazol, Nistatina y Ketoconazol, y todas fueron sensibles a Anfotericina b. Los metales pesados que fueron más tóxicos para los hongos filamentosos fueron Ni, Hg, Pb, y los menos tóxicos fueron Cu, Zn, Mn, Mo, Fe, V. Los géneros de hongos más resistentes a los nueve metales pesados probados son en orden descendente: Aspergillus sp., Fusarium sp. Stachybotrys sp., Penicillium sp., Ulocladium sp., Alternaria sp., Curvularia sp., Pythium sp., Mucor sp. y Rhizopus sp.

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