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https://hdl.handle.net/20.500.12371/21037

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Aislamiento e identificacion de hongos filamentosos en diferentes servicios hospitalarios y, accion fungicida de agentes quimicos y antimicoticos empleados de rutina en un hospital
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Garcia Leon, Miguel Leonardo; Meneses Sanchez, Maricruz; Perez Toriz, Oscar
Los hongos se encuentran distribuidos mundial y extensamente en la naturaleza, se les puede encontrar en el suelo, aire, agua. La gran mayoría de estos organismos son saprófitos, algunos otros se encuentran parasitando algunos vegetales o animales. Los grupos de hongos de mayor interés son: ornamentales, nutricionales, tóxicos, alucinógenos, medicinales, contaminantes y patógenos. Todos y cada uno de éstos se dividen en muy grandes y variados grupos taxonómicos, haciendo hincapié en las divisiones que se tienen en los hongos patógenos Uno de los grandes problemas que aquejan a la humanidad son las infecciones causadas por hongos en los ambientes hospitalarios como lo son: Aspergillus sp, Ulocladium sp. Trichoderma sp, Penicillium sp. Cladosporium sp, Phialophora sp, Fonsecae sp, Aerobasidium sp, entre otros. El aire es el medio que transporta los hongos de fuentes como el suelo, escombros de construcción, o ambientes hospitalarios mohosos. Aunque el respirar hongos transportados por el aire es común y no afecta la salud de la mayoría de los individuos, los pacientes hospitalizados con una supresión inmunológica extrema son susceptibles a infecciones con esos hongos transportados por el aire y que pueden crecer a la temperatura corporal. Generalmente a los pacientes se les mantiene en ambientes controlados durante los periodos de fuerte supresión inmunológica. Los controles ambientales para la ventilación de esporas micóticas (CVEM) incluyen un incremento en los cambios del aire, habitaciones con presión positiva y aire altamente filtrado. Cuando quede determinado que dichos individuos hayan experimentado una infección hospitalaria debida a hongos filamentosos oportunistas transportados por el aire, se requiere de una investigación para determinar si el ambiente controlado falló o si hubo otras interrupciones en el procedimiento prescrito. El muestreo del aire no debería de emprenderse a la ligera, ya que la conducción y la interpretación de los cultivos de aire para hongos son relativamente complejas. Omnipresentes en todos los ambientes, los hongos en ambientes controlados deben ser cuantificados y sus números deben ser comparados con aquellos en el aire ambiental de los ambientes contiguos no controlados. Estos resultados suministrarán una base para determinar la eficacia del ambiente controlado bajo sospecha. Aunque el muestreo ambiental del aire de hospital para hongos no es recomendado como rutina, existe un número de situaciones en las cuales puede juzgarse necesario: 1.- Cuando hay infecciones hospitalarias que se deben a hongos ambientales comunes, transportados por el aire. 2.- Durante las construcciones interiores o exteriores cerca de pacientes susceptibles. 3.- Antes de la ocupación inicial de ambientes especiales controlados. 4.- Cuando se están estableciendo y manteniendo los procedimientos necesarios para lograr aire más limpio. Por lo general, las pruebas microbiológicas deberían limitarse a los ambientes asociados con pacientes comprometidos inmunológicamente en los protocolos de transplante. Las habitaciones con flujo laminar para otras aplicaciones hospitalarias (salas quirúrgicas, cocina, unidad de cuidados intensivos, etc.), son probadas con un contador de partículas. La selección adecuada de técnicas, pruebas y muestreo son críticas si los resultados han de ser significativos. Existe una serie de métodos para el muestreo de varios tipos de superficies y aparatos. Debido a la falta de directrices estándar o protocolos, y también debido a la complejidad y variedad de superficies y aparatos médicos, el microbiólogo deberá necesariamente seleccionar la metodología apropiada revisando la literatura actual y usando su juicio científico, estudios epidemiológicos y sentido común. Aún más, no se debería llevar a cabo cultivos ambientales o de aparatos médicos si no se han establecido criterios sobre los posibles resultados de los cultivos y las acciones a tomar. Uno de los grandes intereses de los diferentes grupos científicos por tratar de controlar estos problemas de salud los han llevado a realizar diferentes estudios como lo fueron: 1.- Celia Carrera (1986), Aislamiento de hongos ambientales en 5 puntos de la ciudad de Puebla, reporta en la ciudad de Puebla como géneros más frecuentes a: Penicillium, Fusarium, Alternaria, Aspergillus, Mucor. 2.- A. Zavala (1991), Identificación de hongos alergénicos en la ciudad de San Luis Potosí, reporta como géneros más frecuentes: Cladosporium, Alternaria, Aspergillus, Penicillium. 3.- Galindo G.J.A. (1988), Hongos intradomiciliarios y su relación con el paciente asmático, reporta en la ciudad de Puebla, menciona como géneros más frecuentes causantes de alergias: Penicillium, Alternaria, Rhizopus, Mucor, Aspergillus. 4.- Ma Elena Cardenas (1992), Frecuencia de hongos contaminantes del ambiente de diversos servicios hospitalarios de un hospital en la ciudad de Puebla, reporta como géneros mas comunes a: Cladosporium, Alternaria, Penicillium, Aspergillus.
Aislamiento y caracterizacion de cepas de Acetobacter diatrophicus de caña de azucar: Purificacion parcial de la nitrogenasa de A.diazotrophicus
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 1998) Pardo Ruiz, Maria Augusta Patricia; Eugenia Baca, Beatriz
Las primeras observaciones sobre interacciones de microorganismos que fijan nitrógeno con plantas no leguminosas, se evidenciaron cuando se aisló Beijerinckia spp en la rizosfera de la caña de azúcar y a Azotobacter paspalii en asociación con Paspalum notatum, (Döbereiner 1961). Una considerable actividad de nitrogenasa, asociada con las raíces de caña de azúcar fue detectada por diferentes autores usando el ensayo de reducción de acetileno (ARA) (Döbereiner et al 1972, Purchase 1980). El primer intento para cuantificar la contribución de la fijación biológica de nitrógeno (FBN) a las plantas fue realizado por Ruschel et al (1975) quienes reportaron una clara incorporación de N15 gaseoso en plantas intactas de 90 días de crecimiento. Sin embargo, sólo hasta que se usaron las técnicas de balance de nitrógeno y dilución de N15, pudo evaluarse la contribución de la FBN en el ciclo de desarrollo de esta planta (Lima et al 1987, Urquiaga et al 1992). Aún antes de que datos exactos cuantificaran la contribución de la FBN en el desarrollo de la caña de azúcar, muchas géneros de bacterias fijadoras de nitrógeno se habían aislado de la rizosfera, raíz, tallos y algunas hojas de la caña de azúcar, dentro de éstas podemos mencionar Beijerinckia, Azospirillum, Azotobacter, Erwinia, Derxia y Enterobacter spp, (Purchase 1980, Dobereiner 1961)) Recientemente se ha aislado una nueva especie de bacteria fijadora de nitrógeno Acetobacter diazotrophicus, que se presenta en gran cantidad en las raíces y tallos de la caña de azúcar (Cavalcante & Döbereiner 1988, Gillis et al 1989). Este diazótrofo, originalmente aislado en medios semisólidos con jugo de caña de azúcar, es un bacilo aerobio Gram negativo, que se desarrolla formando una película en medios semisólidos libres de nitrógeno con 10% de sacarosa, después de 7 a 10 días de desarrollo forma una película delgada en la superficie, este desarrollo mejora cuando la concentración de glucosa y sacarosa es alta (10%). La producción de ácido provoca una disminución del pH hasta 3 o menos, pero su crecimiento y la fijación de nitrógeno continua a este pH por varios días, (Stephan et al 1991). Esta bacteria no posee nitrato reductasa lo cual le permite desarrollarse a altas concentraciones de nitrato, el amonio causa sólo la inhibición parcial de la actividad de la nitrogenasa, especialmente cuando la bacteria se desarrolla en 10% de sacarosa (Texeira et al 1987, Boddey et al 1991), también muestra una alta tolerancia al oxígeno en vida libre, (Reiss et al 1990). La bacteria se ha aislado de muchas variedades de caña de azúcar en diferentes regiones de Brasil, Cuba, Australia y México, (Fuentes Ramírez et al 1992, Li & Macrae 1991). La FBN en todos los microorganismos diazótrofos está mediada por el sistema enzimático de las nitrogenasas, éstas no muestran diferencias importantes cuando se aislan y purifican. Los mecanismos por los cuales se protege este sistema enzimático de la acción del oxígeno, marcan la diferencia de un microorganismo diazótrofo a otro. Las características particulares de la FBN en A. diazotrophicus como son: un metabolismo oxidativo activo, tolerancia de los microorganismos intactos a altas tensiones de oxígeno y continuar la fijación de nitrógeno aún a pH de 2.5 hacen interesante el estudio de la nitrogenasa de este microorganismo y de los mecanismos por los cuales este proceso es resistente a las altas tensiones de oxígeno y los bajos pHs. En el presente trabajo, logramos aislar nueve cepas de A. diazotrophicus a partir de 150 muestras de diferentes cultivos, 135 fueron de caña de azúcar, 12 de maíz y 3 de pasto forrajero. Las nueve cepas fueron aisladas de caña de azúcar, una se aisló de raíz principal y ocho del tallo; éstas se caracterizaron por métodos microscópicos, tintoriales, bioquímicos y fisiológicos, asimismo, se determinó su capacidad de fijación de nitrógeno en presencia y ausencia de nitrato. Lo anterior se realizó con la finalidad de seleccionar, una cepa nativa que fuera buena fijadora de nitrógeno, comparando la actividad específica de nitrogenasa de las cepas nativas y tipo. Se eligió a la cepa tipo PAL5. Esta cepa se eligió debido a que: fue la cepa que mostró mayor actividad específica de enzima en comparación con otras cepas tipo y con las cepas nativas. Con Acetobacter diazotrophicus PAL 5 se realizaron ensayos para determinar las condiciones óptimas de cultivo masivo en un fermentador. Una vez obtenido el cultivo masivo se lisaron las células y se determinaron las condiciones óptimas para la actividad de nitrogenasa en un extracto crudo; a partir de este extracto se realizó la purificación parcial de la enzima, por medio de cromatografía en columna de intercambio iónico, se detectó la presencia de la enzima en las fracciones por medio de anticuerpos policlonales anti Avl y Av2, utilizando la técnica de inmunoelectrotransferencia y por la técnica de ARA. Lográndose detectar una de las fracciones de la enzima. Por último se determinó la actividad de la enzima en cultivos que se desarrollaron en diferentes tensiones de oxígeno, la detección se realizó utilizando las dos técnicas antes mencionadas. Detectando que la enzima presentaba mayor actividad a tensión de oxígeno de un 4% v/v y posteriormente decaía su actividad, lo que concuerda con el comportamiento de otras nitrogenasas que se han purificado de microorganismos aerobios, por la técnica de inmunoelectrotransferencia se logró detectar que a mayor porcentaje de oxígeno en el medio, aumentaba la cantidad de una de las fracciones.
Aislamiento y caracterizacion parcial de cepas silvestres de Bacillus thuringiensis del estado de Puebla
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2002) Navez Gonzalez, Daysi; Vazquez Cruz, Candelario
Bacillus thuringiensis es una bacteria ampliamente distribuida en el medio ambiente, principalmente se encuentra en suelo. Por su actividad bioinsecticida ha sido utilizada para el control biológico de insectos. Produce una protoxina que se acumula en forma de cristal durante la esporulación que mata a insectos de diferentes órdenes en su estado larvario. En el presente trabajo se aislaron 500 cepas de B. thuringiensis de 149 muestras de suelo/humus de diferentes zonas del Estado de Puebla, México. Se observó que la forma predominante de los cristales de las cepas aisladas es redonda o esférica (98.6%), solo un aislado contiene un cristal en forma de barra. La detección de genes mosquitocidas por hibridación ADN-ADN mostró que el gen predominante es el gene cry44a (10.2%). Las cepas aisladas DNG93II, DNG941, DNG95 mostraron homologia con los genes cry4Aa, cry10Aa y cryllAa. Mediante PCR y con uso de oligonucleótidos específicos para estos genes se amplificaron fragmentos de 1579 pb para cry4Aa, 1290 pb para cry10Aa y 1422 pb para cryllAa, estos patrones de amplificación se esperarían en cepas con genotipo semejante a B. thuringiensis subsp israelensis (Bti), como ocurrió en los PCRs de estas tres cepas. También presentan patrones de proteinas muy similar al de B. thuringiensis subsp israelensis y tienen actividad tóxica en larvas de Culex quinquefasciatus y Aedes aegypti. Solo la cepa DNG102III mostró homología con los genes cry10Aa y cryllAa, y por PCR se amplificó un fragmento de 600 pb con oligonucleótidos para cry10Aa. Además, presentó un patrón de proteinas semejante a la de B. thuringiensis subsp jegathesans o B. thuringiensis subsp medellin las cuales son tóxicas a mosquitos. En este estudio encontramos que el 15% de las cepas aisladas presentan genes homólogos a los genes mosquitocidas y solo 0.8% tiene actividad tóxica.
Analisis del papel de los flavonoides en la colinizacion de frijol por Gluconacetobacter diazotrophicus
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2001) Trujillo Lopez, Maria Alejandra; Cano Camacho, Horacio; Trujillo Lopez, Maria Alejandra
La colonización ha mostrado ser un factor importante en el establecimiento de la interacción entre bacterias potencialmente benéficas a plantas. Estudios recientes de bacterias diazotroficas dan importantes contribuciones a extender la FBN a otros tipos de cultivo diferentes a plantas leguminosas. Este tipo de interacciones se establecen en respuesta a múltiples señales reguladoras, de los cuales los flavonoides han mostrado ser señales comunes necesarias para el establecimiento de las interacciones planta- microorganismo. Los flavonoides son liberados por la raiz e influyen en la expresión de genes bacterianos, en la quimiotaxis, en la prevención de la distribución de patógenos, asi como, en la promoción de la colonización. Dado a que nosotros estamos interesados en identificar factores potenciales involucrados en la interacción primaria planta diazótrofo, analizamos la capacidad de Gluconacetobacter diazotrophicus (un endófito de caña de azúcar) a responder a estos metabolitos. Para asegurar la posibilidad de que G diazotrophicus pudiera responder a estos químicos producidos por las raices, nosotros inducimos la producción de flavonoides en las plántulas de frijol común por estrés con luz UV, e infectamos con el diazótrofo. En este trabajo, nosotros reportamos cambios cualitativos y cuantitativos en la adherencia de la bacteria a las raíces de las plántulas tratadas con luz UV, también mostramos resultados de al menos 1 compuesto flavonoide, aislado de las raíces de plántulas de frijol irradiadas con luz UV con un efecto positivo sobre la colonización, además del papel de flavonoides estándares naringenina y daidzeina como inductores de la colonización en este sistema de estudio.
Análisis genético de PerA (BfpT), el regulador transcripcional de los operones bfp y per en Escherichia coli enteropatogena
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Tecpanecatl Xihuitl, José Sergio; Martínez Laguna, Ygnacio; Puente García, José Luis
En Escherichia coli enteropatógena la producción del pilus BFP es dependiente del regulador PerA (BfpT), un activador transcripcional de la familia AraC/XylS. PerA es una proteína de 274 aminoácidos cuyo extremo carboxilo (trecho de 99 aminoácidos), contiene dos dominios a-hélice-vuelta-a-hélice (HTH) similares a los dominios de unión a DNA de algunas proteínas reguladoras. En este estudio se generaron mutantes de PerA (BfpT) en aminoácidos del dominio HTH-2 y fueron analizadas en su capacidad para activar la expresión de fusiones transcripcionales y de unión a DNA. Dos de las mutaciones fueron dirigidas a los residuos Tirosina 255 y Prolina 259 (mutantes PerA-Y255A y PerA-P259A), las cuales afectaron drásticamente la capacidad de PerA de activar la expresión de las fusiones transcripcionales bfpA-cat y perA-cat. Adicionalmente, se obtuvo la mutante PerA-K260Ocre en la cual se introdujo un codón de paro en la posición 260 y una doble mutante con cambios en los residuos Lisina 249 y Tirosina 255. En ambos casos se observó un efecto similar a las mutantes anteriores, remarcando la importancia de estos aminoácidos en la capacidad de PerA de activar a los promotores Ppert y Pbfpt. Posteriormente, las proteínas mutantes PerA-Y255A y PerA-P259A fueron purificadas como proteínas de fusión a MBP y utilizadas en experimentos de interacción proteína-DNA. Nuestros datos indican que el dominio HTH-2 está involucrado en el reconocimiento y la unión a las secuencias reguladoras de los genes blanco, lo cual es concordante con lo determinado para otras proteínas de la misma familia.
Asociacion de algunos factores ambientales con la presencia de anticuerpos anti Mycoplasma penetrans en pancientes con sindrome antifosfolipido
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Herrera Saldivar, Elizabeth; Gil Juarez, Constantino; Cedillo Ramirez, Maria Lilia
El Sindrome Antifosfolipido (SAF) se caracteriza por la presencia de trombosis venosa y lo arterial, pérdidas fetales recurrentes y trombocitopenia, asociadas a niveles elevados de anticuerpos antifosfolipido. Basados en los escasos reportes que asocian la infección por micoplasmas con el SAF, este trabajo intenta determinar la presencia de anticuerpos mediante las técnicas de ELISA y Western blot, asi como la identificación de los factores ambientales que pudieran contribuir al desarrollo o exacerbación de la enfermedad. Durante un año se colectaron muestras de suero y plasma de 88 pacientes del sexo femenino de las cuales 18 fueron de SAF primario, 26 de SAF secundario y 44 de Lupus Eritematoso Sistémico (LES), con un rango de edades comprendida entre los 13 y 64 años. Se detectaron anticuerpos anticardiolipina en 5/18 pacientes con SAF, 5/26 con SAF secundario, 2/44 en LES y 0/44 en el grupo control. El estudio serológico mostró la presencia de anticuerpos tipo IgG dirigidos contra M. penetrans mediante la técnica de ELISA en 8/18 pacientes con SAF, 20/26 pacientes con SAF secundario, 20/44 con LES y 2/44 en el grupo control. Los anticuerpos de tipo IgM determinados por ELISA fueron 14/18 pacientes con SAF, 20/22 pacientes con SAF secundario, 33/44 con LES y 2/44 en el grupo control. Los anticuerpos de tipo IgG detectados por Western blot fueron 13/18, 11/19, 13/24 y 2/44 respectivamente para SAF, SAF secundario, LES y el grupo control. Los anticuerpos de tipo IgM detectados por Western blot fueron 13/18, 13/19, 16/24 y 2/22 respectivamente para cada grupo. No fue posible determinar el papel que juegan los factores ambientales en la etiologia, curso, y exacerbación de la enfermedad debido a que el tamaño de la muestra fue pequeño, por lo que se sugiere para estudios posteriores ampliar el número de muestras Basados en los reportes publicados y en los resultados obtenidos, se sugiere que la presencia de anticuerpos dirigidos contra micoplasmas en la sangre de estas pacientes no fue un evento casual, y que muy probablemente estos microorganismos pudieran jugar un papel importante en el desarrollo de la enfermedad, evento que probablemente sea coadyuvado por algún factor ambiental y predisposición genética del paciente.
Bioestimulantes para el desarrollo radicular y foliar de especies forestales en etapa de plantula
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2011) Posadas Hernandez, Gisela; Barrios Diaz, Benjamin; Dominguez Hernandez, Francisco
El deterioro de los suelos por causa de la actividad excesiva agropecuaria han causado la perdida de capa arable, fertilidad, nutrientes, limitaciones en la infiltración de agua, entre otros factores, ha generado que las plantaciones inducidas para repoblar las áreas agropecuarias abandonadas no tengan los suficientes nutrientes para su desarrollo radicular y foliar, por eso es necesario la utilidad de bioestimulantes comerciales y sustancias húmicas derivadas de la leonardita (K-tionic, Arysta LifeScience Chile S.A., 2010). La adición de bioestimulantes y sustancias húmicas puede favorecer el desarrollo radical tanto en forma directa como indirecta. La aplicación de estas enmiendas orgánicas estimula la producción de raíces finas o zona pilífera (Paulo et al., 2007) lo que favorece la absorción de nutrimentos. Indirectamente, los bioestimulantes pueden mejorar las propiedades físicas del suelo, como la estructura y la densidad aparente, mediante un efecto floculante propio de la materia orgánica. Esto mejora el movimiento del aire, el agua, y los nutrimentos; lo que permite incrementar el crecimiento y la penetración radical. Las enmiendas orgánicas también pueden aumentar la capacidad de intercambio catiónico de los suelos y favorecer la proliferación de microorganismos benéficos (Paulo et al., 2007). El cultivo de árboles de navidad es una alternativa para el desarrollo sustentable en numerosas áreas rurales del país, pero al mismo tiempo es una actividad de gran importancia ecológica, económica y social (CONAFOR, 2009). Su importancia ecológica radica principalmente en la reincorporación al uso forestal en terrenos que carecen de cubierta arbórea o que son objeto de actividades agropecuarias de baja productividad y de mínima rentabilidad, capturan carbono a través de la fotosintesis, contribuyendo así a la mitigación del cambio climático global y a la disminución del efecto invernadero, además, el cultivo de árboles de navidad permite desalentar la extracción clandestina de árboles pequeños de los bosques (CONAFOR, 2009). La importancia económica de este cultivo ha permitido la producción de planta en viveros procedentes de plantaciones especializadas de México, y son productos de alto valor agregado y de rápida colocación en el mercado (CONAFOR, 2009), y asi contribuir a la disminución de la importación ya que para el año 2008 fue de 1, 248, 363 árboles de navidad SEMARNAT (2009). La importancia social permite la generación de empleos y dar un uso sustentable y productivo al suelo. La superficie plantada actualmente es de aproximadamente mil 750 hectáreas en 14 estados, destacando el Estado de México con 800 ha; el Distrito Federal con 220 ha; Guanajuato con 210 ha, Veracruz con 195 ha; Michoacán 130 y al Estado de Puebla con sólo 100 ha. El resto se distribuyen en Nuevo León, Morelos, Hidalgo, Querétaro, Tamaulipas y otras entidades (CONAFOR 2009), con una producción nacional de 700 mil y la demanda es de 1.2 millones. En Puebla su producción es de 160 mil y la demanda es de aproximadamente 200 mil árboles de navidad, plantados en 25 municipios de la Sierra Norte (CONAFOR, 2009). En la producción de árboles de navidad se aprovechan especies nativas, con lo que se favorece su conservación (Álvarez et al., 2007). Tal es el caso de Pinus ayacahuite var. veitchii Shaw, Pseudotsuga macrolepis Flous, Pinus cembroides Zucc., Abies religiosa (HBK.) Cham. & Schltdl. y Pinus halepensis Miller (CONAFOR, 2009). En el Municipio de Tetela de Ocampo, no existe evidencia de plantaciones de árboles de navidad, es por ello, que se estableció una plantación comercial de pinos de navidad en un claro y área agropecuaria abandonada, pero el ciclo crítico es en la etapa de plántula cuando se establece en campo entre los 6 y 12 meses de su trasplante, por lo tanto, la estimulación oportuna de sustancias húmicas en Pinus ayacahuite y Pinus cembroides es de vital importancia ya que estas especies carecen de pelos absorbentes en la primer etapa de crecimiento (González et al. 2006). Por ello, es necesario aplicar nutrimentos adicionales y complementarios para mejorar la nutrición y el crecimiento con el objeto que aumente la resistencia y sobrevivencia de la plantación y así su desarrollo sea homogéneo (Finck, 1988). De acuerdo a Musálem y Fierros (1996) se considera plántula en la primera etapa después de que la semilla ha germinado, en esta etapa las plántulas se encuentran más o menos mezcladas con la vegetación herbácea, presentan de 2 a 15 cm de altura y se observa una alta tasa de mortalidad. El presente trabajo tiene como finalidad determinar el crecimiento de la zona pilífera o de absorción de acuerdo con la dosis de aplicación combinada de los bioestimulantes por un periodo de seis meses de establecidas las plántulas y la estimación de los parámetros organolépticos de las especies forestales.
Bioindicadores de la contaminacion atmosferica de la cuidad de Puebla: Poblaciones Bacterianas
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2002) Mendoza Hernandez, Jose Carlos; Cedillo Ramirez, Lilia; Muñoz Garcia, Andres
El objetivo de este trabajo fue determinar las poblaciones bacterianas predominantes en la atmósfera de cinco zonas (Norte, Sur, Centro, Sureste, Noreste) de la Ciudad de Puebla, y correlacionarlo con los factores de temperatura y humedad, realizar la identificación de bacterias, determinando su resistencia a antibióticos y a metales pesados, así como la identificación de actinomicetos por microscopía de fuerza atómica. En el aire extramuros e intramuros la mayor carga bacteriana se presentó en la zona Sur. El análisis estadístico ANOVA (Tukey-Kramer) índica que en el aire extramuros existe una diferencia significativa (p<0.01) entre la zona Sur y las otras cuatro zonas, sin embargo en el aire intramuros solo hubo una diferencia significativa (p<0.05) entre la zona Sur y la zona Centro. Para Actinomicetos en el aire extramuros la mayor carga se presentó en la zona Sur, mientras que en el aire intramuros correspondió a la zona Norte. Realizando el análisis estadístico, solamente se encontró diferencia significativa en el aire extramuros (ANOVA Tukey-Kramer, p<0-05) entre la zona Sur y la zona Centro. Los géneros bacterianos Gram Negativos aislados del aire extramuros e intramuros de las cinco zonas de la Ciudad de Puebla, en orden descendente de frecuencia, fueron Enterobacter sp., Enterobacter aerogenes, Pseudomonas fluorescens, Klebsiella oxytoca, Citrobacter sp., Proteus vulgaris, Acinetobacter sp., Proteus mirabilis, Citrobacter freundii, Shigella sp. y Enterobacter cloacae. Para el caso de las bacterias Gram Positivas los géneros correspondieron a: Enterococcus sp, Staphylococcus sp., Staphylococcus saprophyticus., Streptococcus sp. En los géneros bacterianos Gram Negativos la mayor resistencia a antimicrobianos fue a cefalotina, seguida de ampicilina, nitrofurantoína y carbenicilina respectivamente, mientras que en los géneros bacterianos Gram Positivos, la mayor resistencia se presentó para Dicloxacilina, Pefloxacina, Ceftazidima y Eritromicina respectivamente. En cuanto a la resistencia a metales pesados, los metales más tóxicos fueron Hg, Cu, Pb, Ni respectivamente, mientras que los menos tóxicos son Mo, V y Fe tanto para los géneros de bacterias Gram Positivas como Gram Negativas.
Bioindicadores de la contaminacion atmosferica de la cuidad de Puebla: Poblaciones Fungicas
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2002) Merino Guzman, Gloria; Espinoza Texis, Alejandra; Muñoz Garcia, Andres
El objetivo de este trabajo fue determinar en que zona de la ciudad de Puebla (Norte, Noreste, Centro, Sur y Sureste) se encuentra la mayor carga fúngica. Se realizó la identificación de hongos filamentosos y levaduras del género Candida. Los géneros de hongos filamentosos aislados corresponden a Aspergillus sp., Alternaria sp., Penicillium, Stachybotrys sp., Pythium sp., Curvularia sp., Fusarium sp., Ulocladium sp. Mucor sp.. Rhizopus sp., Cladosporium sp. Para el aire extramuros, la zona Norte fue la que presentó una mayor carga de hongos filamentosos con respecto a las otras cuatro zonas, mientras que en el aire intramuros la zona Sur fue la que presentó una mayor cantidad de propágulos. En el aire extramuros, el análisis estadístico realizado ANOVA (Kruskall-Wallis) no presento diferencia significa, mientras que para el aire intramuros se realizó la prueba ANOVA (Tukey-Kramer) sin presentarse tampoco diferencia significativa. A los diferentes géneros de hongos filamentosos aislados se les determinó su resistencia a metales pesados (Hg, Pb, Mn. Ni, Mo, V, Fe, Cu y Zn) a las concentraciones de 10, 25, 50, 100 y 200 ppm. Las especies de hongos levaduriformes aislados corresponden a Candida krusei (80%), Candida albicans (13.3%) y Candida glabrata (6.7%). Para el aire extramuros la zona Sur fue la que presentó mayor cantidad de UFC, además de obtenerse una diferencia significativa (ANOVA Tukey-Kramer, p<0.01) con las otras cuatro zonas, mientras que para el aire intramuros la zona Norte fue la más densamente poblada, obteniéndose una diferencia significativa (ANOVA Kruskall-Wallis, p<0.018). De las levaduras del género Candida, Candida albicans fue resistente a Fluconazol, con una mayor proporción que a Bifonazol, Nistatina y Ketoconazol, y todas fueron sensibles a Anfotericina b. Los metales pesados que fueron más tóxicos para los hongos filamentosos fueron Ni, Hg, Pb, y los menos tóxicos fueron Cu, Zn, Mn, Mo, Fe, V. Los géneros de hongos más resistentes a los nueve metales pesados probados son en orden descendente: Aspergillus sp., Fusarium sp. Stachybotrys sp., Penicillium sp., Ulocladium sp., Alternaria sp., Curvularia sp., Pythium sp., Mucor sp. y Rhizopus sp.
Búsqueda de los productos de expresión de la helicasa tipo RecQ de región subtelomérica en Ustilago maydis
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Vaquero Vera, Araceli; Sánchez Alonso, Patricia G.
Las helicasas RecQ presentan actividad de desenrollamiento de DNA doble en una dirección 3'-5', su actividad catalítica es dependiente de la presencia de ATP, de la concentración de iones Mg+2 y es estimulada por las proteínas de unión a DNA de cadena sencilla (SSB). En diversos organismos, desde bacterias a humanos, se han descrito helicasas homólogas a RecQ, las cuales de manera general participan en recombinación homóloga, (relacionándolas así en procesos de reparación de ruptura de doble cadena), así como en la supresión de recombinación ilegítima. Además recientemente se ha descrito que son capaces de desenrollar estructuras estabilizadas por cuartetos de guanina (4G), involucrándose en la resolución de estructuras aberrantes formadas durante el proceso de replicación. Debido a la homología que presentan y a sus características funcionales semejantes, se conformó una subfamilia denominada Helicasas RecQ. En Ustilago maydis se reportó previamente, un marco de lectura abierto de 2664 pb con homología a helicasas de la subfamilia RecQ, albergada en la región subtelomérica a la cual se le denominó UTASa, la cual es repetitiva, altamente conservada, y se encuentra localizada casi exclusivamente en el extremo de los cromosomas. Estas secuencias asociadas a telómero, forman un mosaico de secuencias moderadamente repetidas que están situadas adyacentes al repetido telomérico en prácticamente todos los organismos. Las secuencias asociadas a telómero parecen no ser esenciales para el mantenimiento del telómero, sin embargo han sido implicados en la propagación del silenciamiento transcripcional, y aislamiento del mismo efecto, como sitio preferido de eventos de recombinación y estabilización de vectores extracromosómicos. En este trabajo, decidimos investigar el papel de la posible helicasa albergada en el elemento UTASa; el primer paso fue buscar la expresión de este marco de lectura abierto (denominado HORF1) por ensayos de RT-PCR. Nuestros resultados indican que el HORF1 se expresa en una cepa con un alto número de repetidos de UTASa, pero no se detectó en una cepa con bajo número de repetidos. Nuestros resultados sugieren un efecto por posición al telómero sobre el gene putativo o defectos estructurales que llevan a la anulación de la expresión en esta cepa por lo que posiblemente no sea necesaria estructural ni funcionalmente. Los ensayos preliminares de sincronización indican que la expresión del HORF1 pudiera llevarse a cabo durante G2/M, lo cual no concuerda con lo reportado por helicasas RecQ, por lo que probablemente no se trata de una verdadera helicasa ReQ.
Busqueda del degradosoma de RNA de Bacillus subtillis
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2002) Cordova Arias, Israel; Vazquez Cruz, Candelario; Olmedo Alvarez, Gabriela
La estabilidad del RNA mensajero (mRNA) es un medio importante por el cual la expresión del gen es controlada. Muchos de los trabajos sobre el recambio del mRNA en bacterias se ha hecho en Escherichia coli, y poco es conocido acerca de su degradación en B. subtilis (Vázquez-Cruz y Olmedo-Alvarez, 1997). Se han hecho importantes avances en los pasados 10 años con la caracterización de elementos en el RNA que actúan en cis y de proteinas celulares que actúan en trans para el control del decaimiento del mRNA. En E. coli se han descrito principalmente cuatro ribonucleasas: dos endonucleasas (RNasa E y RNasa III) y dos exonucleasas (polinucleótido fosforilasa o PNPasa y RNasa II) con actividad 3'->5". Adicionalmente se ha descrito la participación de la poli(A) polimerasa (Grunberg-Manago, 1999). La RNasa E y la PNPasa se encuentran en un complejo multienzimático llamado degradosoma. En este complejo se incluye a la RNasa E, PNPasa, una helicasa dependiente de ATP (RhIB) miembro de la familia DEAD, y la enolasa, que es una enzima glicolitica (Py y cols., 1994). También hay proteínas adicionales asociadas a este complejo como proteinas de choque térmico, las chaperonas GroEL y Dnak, y la polifosfato cinasa, cuyo papel dentro del degradosoma es desconocido. En un estudio hecho en B. subtilis por Bechhofer en 1998 se reportó el primer análisis de la deleción en el gen pnp, que codifica para la PNPasa, indicando que la degradación del mRNA no fue severamente afectada a pesar de que en otros reportes se aseveró que la PNPasa es la principal exoribonucleasa 3'- >5' (Bechhofer y Wang, 1998). En B. subtilis no se conoce un homólogo la RNasa E de E. coli, que además de ser la principal endoribonucleasa, es la proteína que ancia al resto de proteínas del degradosoma. De igual forma, no se conocen otras exonucleasas similares a las más importantes en E. coli. Debido a que hay poca información acerca de los mecanismos coordinados de degradación del RNA en B. subtilis, en principio es necesario identificar los genes de las proteinas que posiblemente participen en la degradación del mRNA, con el fin de tratar de esclarecer si en B. subtilis existe un degradosoma de mRNA similar al de E. coli. Por medio de PCR amplificamos las secuencias de los genes pnp y yqfr que codifican respectivamente para las proteínas PNPasa y la helicasa YqfR de B. subtilis. Esta última es homóloga a la helicasa RhiB de E. Coli (34% de identidad). Las secuencias se clonaron en el vector de expresión pTrcHisA. Ambas secuencias expresaron péptidos de 84 kDa para la proteína PNPasa y de 49.8 kDa para la proteína YqfR. Se secuenció la parte N- terminal de cada una de las proteínas y las secuencias obtenidas de las dos proteínas fueron idénticas a las reportadas en el banco de genes. Purificamos a las 2 proteínas por cromatografía en columnas de níquel y se analizó la interacción de estas proteínas con extractos de B. subtilis crecidos a 30 y 37°C y también bajo un gradiente de glicerol del 10, 20 y 30%. En el análisis de interacción de proteínas PNPasa y YqfR hecho en este trabajo bajo ninguna condición se observó la presencia de alguna otra proteína asociada. De acuerdo con nuestros resultados es posible no exista el degradosoma en B. subtilis como el descrito en E. coli.
Busquedad de bacteriofagos del genero Brucella, a partir de desechos agroindustriales relacionados a la ganaderia
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Muñoz Zurita, Guillermo; Cedillo Ramirez, Lilia; Gil Juarez, Constantino
La contaminación ambiental se puede considerar como la introducción o presencia de sustancias, organismos o formas de energia en ambientes o sustratos a los que no pertenecen y en cantidades superiores a las propias de dichos sustratos por un tiempo suficiente y bajo condiciones tales que interfieren con la salud y la comodidad de las personas, dañando los recursos naturales, o alterando el equilibrio ecológico de la zona (Bell, 1998). La contaminación ambiental es inherente a las actividades del hombre iniciando durante la Revolución Industrial, a fines del siglo XVIII, y acentuändose después de la Segunda Guerra Mundial, cuando aumentan en el mundo el consumo de energia, la producción y uso de diversas sustancias químicas para las cuales los mecanismos naturales de asimilación o degradación han sido rebasados o no existen (Seoanez, 1994). El hombre a diferencia de los demás animales, no se adapta pasivamente a su ambiente, sino que lo adapta a sus necesidades, en este proceso de modificación, los resultados no siempre son benéficos para el hombre. En muchos casos, sus actividades como la construcción y operación de máquinas y otros instrumentos producen cambios que dañan al ambiente en su conjunto (Seoanez, 1999). Los seres vivos están expuestos a la contaminación en todas sus formas, entre ellas la contaminación por residuos radiactivos, desechos industriales desechos de automotores, pesticidas, herbicidas, desechos urbanos sólidos y desechos orgánicos animales y humanos (Stanley, 1994). En los agrosistemas de los paises en desarrollo como México, conviven con los residuos sólidos y líquidos, los tiraderos a cielo abierto y sin control, y los rellenos sanitarios que se ubican lejos de las áreas urbanas y cerca de las tierras de cultivo. Asimismo en los canales, rios, barrancas y caminos vecinales que colindan con parcelas agrícolas, se tiran frecuentemente residuos de manera inadecuada que generan problemas ambientales de los que no hay información precisa sobre la dimensión del fenómeno (SEDESOL, 1994). En México, el 50% de los residuos generados se colocan en sitios no adecuados para su disposición final, creando problemas de contaminación al suelo que los recibe, al agua superficial cuando estos son arrastrados a cuerpos de agua, al agua subterránea cuando se infiltran los contaminantes contenidos en los líquidos provenientes de la descomposición de los residuos, y al aire cuando son quemados sin control (INE, 1998). El problema de agua contaminada fue reconocido por Hipócrates (450 a. C) quien sugería la filtración y ebullición del agua como medidas preventivas. Actualmente David y cols. clasifican a las sustancias que contaminan el agua en ocho categorías: desagües, agentes patógenos, nutrientes, sustancias químicas orgánicas (como los detergentes y los plaguicidas), sustancias químicas inorgánicas, sedimentos, materiales radiactivos y calor (David et al; 2000).
Caracteriación de secuencias involucradas en la secreción de proteasas en Pasteurella multocida
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2005) Juárez Escalante, Miriam; Vázquez Cruz, Candelario; Negrete Abascal, Erasmo
P. multocida es una bacteria gram negativa que infecta a una gran variedad de animales y en algunas ocasiones al humano. Se conocen algunos factores de virulencia de los cuales se vale este microorganismo para ingresar, colonizar e infectar a su hospedero, pero la participación de las proteasas como factor de virulencia no esta claramente establecida. Se han realizado diversos trabajos enfocados en el estudio de las proteasas secretadas por algunos miembros de la familia Pasteurellaceae, pudiendo ser detectados en especies del género Actinobacillus, Haemophilus y Pasteurella. Algunas de estas proteasas secretadas han sido clasificadas como metaloproteasas ya que son inhibidas por EDTA, EGTA y reactivadas por calcio. Así mismo, son capaces de degradar inmunoglobulinas. Una limitante que ha sido detectada para estudio de las proteasas secretadas de P. multocida es que existe una fuerte regulación en la expresión de estas proteasas por parte de la bacteria, que las expresa in vitro únicamente durante las primeras resiembras en el laboratorio, apagando su expresión en posteriores resiembras, lo que dificulta su obtención. Luna Rivero, en el 2003, logro clonar y mantener estable en E. coli la expresión de una proteasa de P. multocida; la caracterización de esta proteasa indicó que se trataba de una metaloproteasa neutra, estable desde 25°C hasta 40°C, y con reactividad cruzada con anticuerpos elaborados contra una proteasa de A. pleuropneumoniae. En este trabajo, se procedió a la clonación de los genes pqqL y lon en un sistema heterologo, mediante técnicas de biología molecular. Los genes clonados se secuenciaron y su actividad proteolitica se analizó en placas con sustrato. Mientras que el análisis de las proteínas secretadas en diferentes etapas de crecimiento de cada una de las clonas se realizó con el uso de zimogramas. Es necesario conocer de manera más clara el papel que desempeñan las proteasas secretadas por P. multocida como factores de virulencia para en un futuro poder desarrollar estrategias terapéuticas en contra de este microorganismo.
Caracterizacion de genes de Azospirillum brasilense Sp7 potencialmente implicados en la colonizacion de raices de trigo
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2002) Carreño Lopez, Ricardo; Eugenia Baca, Beatriz
Azospirillon es una bacteria que fija nitrógeno, y promotora del desarrollo vegetal; que se ha aislado de una variedad amplia de plantas de interés agronómico como granos y pastos forrajeros. Cuando el microorganismo se inocula a la planta hospedera estimula el desarrollo del sistema radical, aumentando la captación de nutrientes. Este efecto benéfico se ha relacionado a la producción y excreción por el microorganismo de sustancias que regulan el desarrollo vegetal o fitoreguladores como son: auxinas, giberilinas y citocininas. Se propone que la producción de la auxina ácido indol-3-acético (ALA) sería el responsable de los efectos observados sobre el sistema radical. Para que una colonización efectiva se realice es necesario que el microorganismo se instale y se multiplique en la rizosfera, para que posteriormente colonice la superficie de la planta. Se han descrito en Azospirillum varias caracteristicas y genes implicados en la asociación con la planta hospedera, por ejemplo la movilidad y la quimiotaxis probablemente tienen un papel importante en los primeros estadios de la interacción. Para que el anclaje firme e irreversible se realice son necesarios los exopolisacáridos producidos por la bacteria, así como una proteina de membrana externa. A pesar del esfuerzo realizado por varios investigadores a nivel internacional el conocimiento sobre los genes y productos génicos que pueden Intervenir en este proceso es aún escaso. Por tal motivo, el objetivo de este trabajo es contribuir al conocimiento de la interacción Azospirillum-planta, caracterizando genes y rasgos que pudieran intervenir en el proceso. Como la producción de AIA y la movilidad superficial. Se evaluó la relevancia de la vía de sintesis del intermediario IPyA, para lo cual se obtuvo una mutante del gene ipdC (gene codificante de la enzima indol piruvato descarboxilasa), por medio de la introducción de un gene de resistencia a la espectinomicina. Se generaron también mutantes alteradas en la vía de síntesis del precursor triptofano (dos mutantes) y en el gene ipdC. Las mutantes se crecieron en medios adicionados con triptofano, indol y ácido-3-indol láctico (ILA), y se cuantificó la producción de AIA en estas dobles mutantes; los resultados obtenidos son consistentes con la presencia de otra via de síntesis de AIA en Azospirillum dependiente de triptofano. Esta via es reprimida cuando la bacteria crece en medio adicionado con malato o gluconato como fuente de carbono, sugiriendo que está sometida a represión catabólica. Estudios en células permeabilizadas indican que el precursor de esta segunda via dependiente de triptofano es la triptamina. La expresión de la fusión transcripcional ipdC-lacZ en cultivo indicó que se expresa al inicio de la fase estacionaria y es independiente de la presencia del triptofano. La transcripción del gene es significativa durante la asociación a las raíces de trigo. La colonización en plántulas de trigo de la mutante ipdC es semejante a la tipo silvestre, asi como el efecto PGPR, sugiriendo que la producción residual de AIA es suficiente para ese efecto. La complementación génica de una mutante espontánea de A. brasilense Sp7, la cepa Sp7S, alterada en la movilidad superficial, condujo al aislamiento de una región de DNA que porta dos ORFs, la secuencia deducida de amino ácidos de la primera indica una alta similitud con la proteína fosforibosil amino imidazol carboxilasa (purK), involucrada en la sintesis de purinas; la otra ORFI presentó baja similitud con una guanilato ciclasa de Acetobacter xylinus. La obtención de mutantes de los dos genes indicó que éstos están implicados en la movilidad superficial y que probablemente se cotranscriban. Las mutantes exhiben flagelos laterales, aunque pareciera que en número menor. La colonización de cada una de las mutantes de los genes purk y ORFI es similar a la de la observada con la tipo silvestre, aunque no se descarta que la colonización en periodos prolongados se afecte por las mutantes. Los datos aportados apuntan a que el proceso de colonización es complejo, y el empleo de mutantes sugiere que varios genes están involucrados. El estudio sistemático de los rasgos y genes implicados en colonización se mantiene crucial para conducir.
Caracterizacion de la respuesta al estrés termico "IN VITRO" y clonacion del gene rpoE de Yersinia pseudotuberculosis
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Suarez Albores, Patricia Guadalupe; Martinez Morales, Javier; Baca Beatriz, E.
Yersinia spp son bacilos Gram negativos, acrobios facultativos, generalmente intracelulares, móviles cuando son aislados del medio ambiente, pero no móviles en el hospedero. El género tiene tres especies de gran importancia médica, debido a que pueden causar enfermedades en humanos, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis y Yersinia pestis, de las cuales esta última es la especie más invasiva, siguiéndole Y pseudotuberculosis y por último Y. enterocolitica (Straley et al., 1993). Las infecciones debidas a Y. enterocolitica y Y. pseudotuberculosis son adquiridas por ingestión de alimentos o agua contaminada. Ambas especies son ubicuas en el medio ambiente; en el humano Y. enterocolitica puede causar varios cuadros clinicos, entre los que tenemos: enteritis, enterocolitis y linfadenitis mesentérica (Bottone, 1997; Noll et al., 1996). Y. pseudotuberculosis es un patógeno que infecta principalmente pájaros y mamíferos causando la enfermedad conocida como pseudotuberculosis; ocasionalmente puede infectar al humano, provocando un cuadro clinico similar al causado por Y. enterocolitica Estas dos especies generalmente causan infecciones auto limitantes. En niños y adultos inmunocomprometidos pueden ocasionar infecciones sistémicas asociadas con endotoxemia (Abigail et al., 1994). Y. pestis, a diferencia de las otras 2 especies, penetra al hospedero por picadura de pulga o por transmisión directa (aerosoles), causando la enfermedad conocida como peste bubónica, o muerte negra (Abigail et al., 1994). Las tres especies presentan tropismo por tejido linfoide, aunque Y. enterocolitica y Y. pseudotuberculosis tienen mayor afinidad por las placas de Peyer's, las cuales se encuentran situadas en el intestino delgado (Abigail et al., 1994; Cheng & Scheewind, 1999). La interacción de Yersinia con células de mamífero, se ha estudiado bioquimica y genéticamente, identificándose asi varios factores involucrados en la adhesión (Yang et al., 1996). Isberg y col. (1988) identificaron en Y. pseudotuberculosis un gene cromosomal, llamado inv (por invasión) que codifica para una proteína de 103 kDa. Esta se localiza en la membrana externa bacteriana y se adhiere a células de mamífero, a través de un receptor de la familia ẞ1-integrina. La síntesis de esta invasina es regulada por temperatura, expresándose mejor a 28 °C (Abigail et al., 1994; Bottone, 1997; Simonet et al., 1992; Yang et al., 1996). Simonet y Falkow (1992) identificaron un gene cromosomal en Y. enterocolitica, llamado ail (attachment-invasion locus), que codifica para una proteína de 17 kDa, la cual permite a la bacteria unirse a cultivos de líneas celulares de mamíferos. Genes homólogos a ail también se encuentran en el cromosoma de Y. pseudotuberculosis y Y. pestis, cuya expresión es regulada por temperatura (37°C) (Bottone, 1997; Simonet & Falkow, 1992). En Y. pestis y Y. pseudotuberculosis se ha caracterizado una adhesina cuya secuencia presenta semejanza a las subunidades del pilus bacteriano. Se conoce como PsaA (pH 6 adhesina) debido a que se expresa mayoritariamente a pH 6. El locus que codifica para esta adhesina ha sido caracterizado en estas dos especies, encontrándose tres genes psaE, psaA, y psaB, de los cuales el producto del segundo gene corresponde a la adhesina correspondiente. En Y. enterocolitica ha sido caracterizada una estructura genética similar al locus psa, la cual se conoce en esta especie como myf (mucoid Yersinia factor). Se sabe que Myf y Psa son similares en cuanto a su regulación y estructura, y es posible que ambas promuevan eventos de adherencia en el hospedero (Abigail et al., 1994; Yang et al., 1996). Otro factor de adherencia determinado en las tres especies, es la proteína Yad/A (Yersinia adherence), la cual es codificada por el plásmido pYV. Esta proteína reconoce en la célula epitelial receptores de la familia ẞ1-integrina. Al igual que la proteína Ail su expresión es regulada a 37 °C (Abigail et al., 1994; Bottone, 1997). En Y. enterocolitica se ha determinado la síntesis de una enterotoxina termoestable conocida como Yst, que está codificada en el cromosoma y presenta propiedades estructurales, fisicoquímicas e inmunológicas similares a la toxina ST de E. coli enterotoxigénica (Mikulskis et al., 1994). La expresión de Yst depende de la fase de crecimiento, temperatura, osmolaridad y pH (Abigail et al., 1994; Mikulskis et al., 1994). Las tres especies patógenas de Yersinia, comparten la presencia de un plásmido de 70-75 kb, el cual es comúnmente conocido como el virulon Yop o plásmido pYV. Este plásmido presenta una serie de genes los cuales codifican para un sistema de secreción tipo III antihospedero, que permite la liberación de proteínas efectoras (conocidas como Yops) en el citoplasma del hospedero (Cornelis et al., 1998) Este plásmido se ha secuenciado completamente en las tres especies, encontrándose aproximadamente 50 genes involucrados en virulencia; un total de 35 genes codifican para la maquinaria de secreción y translocación (Ysc), estos se localizan en una región específica del plásmido, flanqueada en ambos lados por los genes que codifican para las proteínas efectoras Yops (Yersinia outer proteins) y sus chaperonas (Syc). Ensayos realizados in vitro indican que la secreción de las Yops ocurre solamente a 37 °C y en ausencia de calcio. Esta termorregulación esta bajo el control del activador transcripcional VirF (denominado LcrF en Y. pestis y Y. pseudotuberculosis) (Cornelis et al., 1998; Cheng & Scheewind, 1999). Las cepas curadas de este plásmido de virulencia, presentan deficiencia en colonizar el intestino de ratón y no causan infección diseminada (Abigail et al., 1994). Y. pestis tiene 2 plásmidos adicionales que no se encuentran presentes en las otras 2 especies patógenas, uno de 110 kb, y el otro de 9.5 kb (Abigail et al., 1994). El género Yersinia al igual que muchos patógenos microbianos, cuando entran al hospedero se enfrentan a factores estresantes, como son pH, temperatura, fagocitosis, etc. El patógeno, para protegerse de estos factores, activa varios mecanismos de resistencia, uno de los cuales es el aumento en la síntesis de un grupo de proteínas conocidas como proteínas de estrés (Sp), cuando el estrés es térmico, se les conoce como proteínas de choque térmico ("Heat shock proteins", Hsp) o de estrés calórico.
Caracterizacion parcial de una cinasa histidinica de Azospirillum Brasilense
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2012) Villarreal Astorga, Cynthia Teresa; Eugenia Baca, Beatriz
Las rizobacterias promotoras del crecimiento vegetal constituyen un amplio grupo de microorganismos del suelo, las cuales cuando se desarrollan en asociación con un vegetal promueven su crecimiento. Uno de los representantes más estudiados de este grupo es el género Azospirillum debido a que se han realizado numerosas investigaciones tanto en aspectos genéticos y bioquímicos, como de sus aplicaciones tecnológicas (Bashan et. al., 2004). Un paso clave para que las PGPR (Plant Growth Promoting Rhizobacteria) ejerzan efectos de promoción del crecimiento es el logro de una efectiva colonización de las raíces. Este proceso requiere de una serie de mecanismos de señalización descritos en varios modelos bacterianos, y que en Azospirillum están poco estudiados En nuestro grupo de investigación se identificó el gene que codifica para la enzima aromático amino transferasa 1 (AAT1), codificada por el gene hisCl de A. brasilense Sp7 (Guerrero-Castro et. al., 2011). En el plasmido en el que se localizó el gene hisC1, se encontró la secuencia de una ORF parcial (la región N-terminal), que presentaba homologia con una cinasa histidinica (HPAT) Las cinasas histidinicas (HK) son proteinas implicadas en señalización que participan en la transducción de señal de los sistemas de doble componente (TCS). quienes convierten los estimulos del medio ambiente en una señal que induce una respuesta celular a través de modificaciones en la expresión de genes (Stock et. al.. 2000) Los TCS funcionan y transducen las señales del entorno a través de reacciones de fosforilación entre dos componentes conservados, una cinasa histidinica (HK siglas en inglés) y un regulador de respuesta (RR, siglas en inglés). En este trabajo se obtuvo la secuencia completa de la cinasa histidinica. El análisis in silico sugiere que en la proteina presuntamente ocurren los dominios caracteristicos de una cinasa hibrida, la localización en el genoma de A. brasilense Sp245 identificó dos genes putativos, colindantes http://genome.ornl.gov/microbial/abra, que presentan homologia con una presunta MCP (proteina de quimiotaxis de unión a metilo) y CheY Se generó la mutante por inserción de un casete de Te, cuya anotación provisional es A brasilense ABHK Te. La cual se afectó en su capacidad de movilidad. considerablemente, en medio minimo, y retardada en medio completo, en relación con Is cepa silvestre, lo que sugiere que la proteina está involucrada en quimiotaxis.
Caracterizacion por microscopia electronica de barrido de heteroestructuras de GaAs-Ge/GaAs de baja dimensionalidad
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2002) Galeazzi Isasmendi, Reina Galeazzi; Silvia Gonzalez, Rutilo; Gomez Barojas, Estela
En este trabajo se hace un análisis de caracterización por microscopia electrónica de barrido, espectroscopia de energia dispersiva y espectroscopia de electrones Auger de heteroestructuras formadas en su mayoría por 15 capas de GaAs y 15 capas de Ge. alternadas, terminando el crecimiento con una capa de GaAs, las cuales fueron crecidas por la técnica de erosión catódica tipo magnetron. El primer objetivo planteado para la caracterización de estas heteroestructuras fue la medición de los espesores de cada una de las capas que forman las heteroestructuras. Para realizar esta medición fue necesario grabar selectivamente las capas de GaAs para definirlas y asi poder hacer la medición. Esto se hizo mediante el uso de una solución compuesta de NH4OH:H₂O:H₂O en proporción 1:5:25. Al realizar el ataque quimico se determinó la velocidad de grabado del GaAs como 2.5 µm/min, lo que nos permite de acuerdo al espesor nominal reportado para las capas de GaAs aplicar un tiempo óptimo para decaparlas. El decapado nos permitió por un lado medir los espesores de las capas y por el otro hacer un estudio comparativo de la morfologia superficial de las capas de Ge. De este análisis se obtuvo, que conforme aumenta el espesor de las capas de Ge y disminuye el de las capas de GaAs la definición de las capas que forman la heteroestructura mejora, y la morfologia superficial se torna más suave. Para complementar el estudio de las heteroestructuras se realizó el análisis de las mismas mediante la caracterización de la composición elemental de algunas muestras con un sistema de Espectroscopia de Energia Dispersiva de rayos-x (EDS) que nos permitió detectar mediante un mapeo elemental que los tres elementos Ga, As y Ge se encontraban presentes en cada una de las multicapas. Finalmente por medio de perfiles de profundidad AES se comprobó que tanto las capas de GaAs como de Ge no son puras ya que las capas de GaAs contienen una cierta concentración de Ge al igual que las capas de Ge contienen un porcentaje de GaAs.
Caracterizacion por SEM, EDS Y PC de muestras de CdSe crecidas por la tecnica de deposito por baño quimico
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Amador Grajeda, Sergio; Silvia Gonzalez, Rutilo; Gomez Barojas, Estela
Con la invención del transistor, la investigación y el desarrollo tecnológico avanzaron a pasos agigantados en años subsecuentes, especialmente en las áreas de dispositivos optoelectrónicos. Las industrias así como los centros de investigación se vieron en la necesidad de desarrollar dispositivos con mejores características, lo cual provocó una tendencia al desarrollo de tecnologías más baratas, más pequeñas y de mejor calidad. En la actualidad existe un gran interés por estudiar materiales que ofrezcan mejores propiedades. Los compuestos semiconductores que tienen mayor auge en la actualidad son los que pertenecen a los grupos III-V y II-VI de la tabla periódica. El selenuro de cadmio (CdSe) pertenece al grupo II-VI y se caracteriza por tener una banda de energia prohibida (Eg) de 1.70 eV a temperatura ambiente [1, 2] y alta fotosensibilidad en el intervalo visible del espectro solar. Este material es importante debido a su aplicación para la fabricación de transductores ultrasónicos [3], fotorresistores, capas luminiscentes [4], diodos de heterounión [5], láseres [6] y celdas solares. Otra aplicación la tiene en la fabricación de transistores por efecto de campo (FETs) en sustratos de vidrio debido a la innovación de los displays planos de cristal líquido [7], éstos normalmente se fabrican con Si amorfo o policristalino. Sin embargo, las ventajas que presenta el CdSe sobre el Si en la fabricación de transistores de capa delgada son una menor temperatura de proceso y una mayor movilidad de sus portadores de carga. La investigación de este material es un tema de actualidad debido a que su densidad y movilidad de portadores de carga son dificiles de obtener predeterminadamente, ya que son sensibles a la variación en estequiometría y a la concentración de impurezas. Por otro lado, une de los proyectos de investigación pionero en el Instituto de Fisica, UAP (IFUAP) ha sido la sintesis del compuesto binario CdS por CBD asi como su caracterización por las técnicas disponibles en este instituto en los tiempos correspondientes [811]. El CdSe es otro compuesto binario II-VI que se ha estado estudiando en el IFUAP. Principalmente, el estudio de la sintesis por CBD de este compuesto se realizó en trabajos anteriores [12, 131. Un estudio detallado de caracterización de este material se realiza en el presente trabajo con el objetivo de llegar a elucidar la influencia de los parámetros de depósito, principalmente del volumen de CdCl, para valores pequeños sobre la razón atómica Cd/Se, asi como también para diferentes tiempos de depósito y observar su influencia sobre la morfología, composición elemental, las propiedades ópticas y eléctricas. Para este análisis se cuenta con un conjunto disponible de películas de CdSe depositadas sobre sustratos de vidrio (corning 2947). Con este propósito se emplean las técnicas: microscopia electrónica de barrido (SEM), espectroscopía en energia dispersiva de rayos-x (EDS) y fotocorriente (PC). Cabe mencionar que los resultados aqui obtenidos se han considerado para mejorar y realizar un estudio más sistemático en cuanto al control de cada uno de los parámetros de depósito para optimizar las caracteristicas deseadas del material, mediante una tesis doctoral, la cual está en proceso. Para poder conocer las propiedades morfológicas, de composición, eléctricas y fotoeléctricas de las películas se hace uso de técnicas de caracterización complementarias con el objeto de obtener información acerca de las características del material en estudio. Un factor importante que se busca cuando se emplean técnicas de caracterización es que éstas no alteren las propiedades intrinsecas del material, o en su defecto que el cambio sea minimo. De aquí que estas técnicas se pueden clasificar como: destructivas y no destructivas. Las técnicas que se van a emplear para el desarrollo del presente trabajo se consideran no destructivas y son: la microscopía electrónica de barrido (SEM), la espectroscopía en energía dispersiva de rayos-x (EDS), y la fotocorriente (PC). Mediante la técnica SEM se estudia la morfología superficial de las películas bajo estudio, así como los defectos superficiales de las mismas. Por EDS se realiza un estudio cualitativo y semi-cuantitativo de los elementos que conforman la película así como la distribución de los mismos a través de un mapeo de rayos-x. La técnica de PC proporciona información sobre la respuesta espectral del material mediante la excitación con fotones, es decir, se puede observar si existen niveles de impurezas o defectos dentro de la película que puedan afectar las características del mismo. Cabe mencionar que la técnica CBD es sencilla de implementar y es de bajo costo; principalmente tiene la particularidad de que se pueden controlar externamente los parámetros de depósito en el baño de reacción. Las muestras que se tienen disponibles para este estudio se crecieron con diferentes parámetros de depósito a saber: el volumen de cloruro de cadmio en la solución de depósito (Vcacı₂ = 1, 3, 6, 7, 9 y 12 ml), el tiempo de depósito (ta= 30, 60 y 90 min) y la temperatura inicial (T;= 42 y 45 °C). En el capítulo 1 de este texto, se describen a groso modo los fundamentos de las técnicas de caracterización que se emplean en el desarrollo del presente trabajo. En el capítulo 2 se describen las características de depósito de las películas de CdSe que se estudian, los procedimientos de caracterización por las diferentes técnicas empleadas: SEM, EDS y PC, y se presentan los resultados obtenidos experimentalmente y su discusión, y finalmente se presentan las conclusiones de este trabajo.
Cascara de nuez (Junglans regla L) como sustrato alternativo para la produccion de plantulas de Pinus patula, en Vivero
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2011) Lopez Escobedo, Romelia; Romero Arenas, Omar; Parraguirre Lezama, Jose Filomeno Conrado
La cáscara de nuez (Juglans regia L.) es un subproducto barato sin aprovechamiento en su producción, sin embargo, cuenta con importantes elementos nutritivos para las plantas. Por esta razón se evaluó el efecto de diferentes tratamientos de cáscara de nuez y otros materiales sobre el crecimiento inicial de P. patula Schl. et Cham., producidas en vivero. Los tratamientos probados fueron: 1 peat moss + agrolita + vermiculita 33% de cada uno, 2 cáscara de nuez + agrolita + vermiculita, 80, 10 y 10% de cada uno; 3 cáscara de nuez, agrolita y vermiculita 50, 25 y 25% de cada uno y 4 cáscara de nuez + agrolita + vermiculita 33.% de cada uno. Se utilizo un diseño experimental completamente al azar, con cuatro tratamientos y cuatro repeticiones. Los resultados mostraron un porcentaje de germinación superior al 80% en todos los tratamientos, sin presentar diferencias estadísticas significativas entre ellos. A los siete meses y medio de edad, las plántulas que se desarrollaron en los tratamientos 1 y 4 presentaron los valores más altos, sin diferencias estadisticas significativas entre ellos para las variables, altura, diámetro, peso seco aéreo, peso seco radicular, peso seco total e indice de Dickson. Para la relación parte aérea/raiz e indice de esbeltez no se presentaron diferencias estadísticas significativas entre los cuatro tratamientos. La cáscara de nuez composteada permite producir plántulas sanas y con buenas características, por lo que es útil como sustrato alternativo para la producción de plantas en vivero, reduciendo los costos de producción en un 33%, sin embargo, será necesario realizar más investigación para determinar los porcentajes óptimos de mezclas que incluya este sustrato. Los bosques están desapareciendo rápidamente y de continuar el actual ritmo de deforestación las zonas boscosas se acabarán en el presente siglo (Greenpeace México, 2009). Entendiendo por tanto que el hombre ha estado relacionado e influyendo en los cambios de la vegetación desde antes de los inicios de la civilización. (WRI, 1990) se estima que desde los tiempos pre-agrícolas los bosques del mundo se han reducido entre cinco y seis mil millones de hectáreas; el más alto porcentaje (32-35%) correspondiente a bosques de climas templados. Según cifras de la Secretaria de Medio Ambiente y Recursos Naturales (SEMARNAT, 2004) 45% del territorio nacional presenta algún tipo de degradación, principalmente por el cambio de uso del suelo destinado a actividades como agricultura, ganadería y otros usos, México ocupa el quinto lugar mundial en deforestación (WRI, 1990). Ante la necesidad actual de restituir la cobertura vegetal desaparecida, a través de programas de reforestación y restauración, especialmente con especies nativas, para diversos fines como son producción de bienes (madera, leña, pulpa, resinas, semillas comestibles y otros productos) y servicios (agua, oxigeno, recreación, captura de carbono) para las comunidades rurales, además de contribuir a mantener el equilibrio del ambiente (Wightman y Santiago, 2003). Los viveros han cobrado un papel relevante como depositarios y proveedores de este tipo de plantas, sobre todo ahora que se reconoce su importancia para la conservación de la biodiversidad (Benítez et al., 2002). México es el país con el mayor número de especies de pinos (Greenpeace México, 2009), estos tienen gran importancia ecológica, económica y social (García y Gonzales, 2003; Ramírez et al., 2005). Pinus patula Schl. et Cham. (ocote, pino rojo, pino gacho), es una especie de gran importancia económica y ecológica debido a su potencial productivo y capacidad para adaptarse a diferentes condiciones climáticas y de suelos, es ampliamente utilizado para proyectos de reforestaciones y plantaciones forestales comerciales que tienen como finalidad la producción de madera de buna calidad por su bajo contenido de resina, libre de nudos y fuste recto (Velázquez et al., 2004). La producción de plantas en vivero de esta especie depende de factores como; la adecuada selección de los sustratos para la preparación de los medios de crecimiento ya que una mezcla adecuada debe tener propiedades físicas y químicas que permitan la disponibilidad oportuna de los nutrimentos y el agua (Burés, 1997). La preocupación de los viveristas radica en los costos alcanzados por la utilización de sustratos importados, actualmente en México se usa como sustrato principal, en la producción de plantas en contenedores rígidos, una mezcla de turba (peat moss), agrolita y vermiculita en proporciones de 6:3:1, por ello se deben buscar opciones en la reducción de costos, que además garanticen la calidad de la planta (Arteaga et al., 2003). Es necesaria la búsqueda de nuevos sustratos alternativos viables para la producción de plantas en vivero, como es la cáscara de nuez de castilla (Juglans regia L.), que es un subproducto de la producción de nuez, la cual alcanza una amplia distribución e importancia económica en el mundo. La producción mundial de nuez con cáscara es de aproximadamente 1.100.000 tn (USDA, Foreign Agricultural Service, 2008); China y Estados Unidos constituyen los principales países productores, con alrededor del 45 y 30% del total, respectivamente. México se ubica en 13º lugar en la producción de nuez a nivel mundial entre 2001 y 2003, con una producción de 230 toneladas anuales, Puebla ocupa el tercer lugar a nivel nacional en producción de nuez de castilla, sólo por debajo de Tamaulipas y Jalisco. La nuez de castilla es uno de los principales ingredientes para la elaboración del tradicional platillo "chiles en nogada" por lo que es un cultivo de gran rentabilidad (Fundación Produce Puebla, 2010). La Secretaría de Desarrollo Rural menciona que el municipio de Tetela de Ocampo, Puebla es considerado un productor importante de nuez de castilla. La cáscara de nuez de castilla es fácil de adquirir y sobre todo de bajo costo, ya que es considerada por los productores del municipio de Tetela de Ocampo, como desecho y sin valor comercial. En el mejor de los casos es incorporada a los terrenos agrícolas sin saber la composición físico-química y las aportaciones de materia orgánica que puede brindar, presenta una descomposición fácil y rápida logrando obtener el material composteado en cinco meses. Este trabajo de investigación contribuirá a demostrar que la utilización de la cáscara de nuez de castilla composteada es útil como sustrato alternativo para la producción de plantas en vivero, reduciendo los costos de producción y contribuyendo de esta forma con el sector productivo forestal.
Clonacion del gen y caracterizacion parcial de una proteasa de Pasteurella multocida
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Luna Rivero, Maria Juana Norma; Vazquez Cruz, Candelario; Negrete Abascal, Erasmo
Pasteurella multocida es un bacilo gram negativo, aerobico facultativo capsulado, no movil que no forma esporas, de amplia distribucion en todo el mundo. Forma parte de la flora normal de nasofaringe tracto gastrointestinal y genital de muchos animales domesticos y salvajes. Esta bacteria pertenece a la familia Pasteurellaceae, en las que tambien se encuentran otros generos como Haemophilus y Actinobacillus. P. multocida ha sido extensamente estudiada desde que aislo por primera vez a finales de 1870 En epocas recientes la aplicación de nuevas tecnologias ha ampliado el conocimiento del microorganismo y su epidemiologia. Sin embargo algunos de los mecanismos moleculares que participan en la infeccion y virulencia de P. multocida aun son desconocidos y este organismo continua causando un amplio rango de enfermedades en aniamles y humanos. P multocida es el agente causal del colera de las aves, septicemia hemorragica en ganado vacuno, rinitis atrofica y neumonia en cerdos y la mas comun fuente de infeccion de tejidos en humano debido a mordeduras de perros y gatos. Con menor frecuencia la bacteria se ha asociado con infecciones que afectan diferentes organos o sistemas del ser humano, por ejemplo se descubrio un caso de meningitis causada por P. multocida al practicar la autopsia de un hombre de 52 años. La bacteria se transmite de animal a animal principalmente por via aerea a traves de aerosoles. Se cree que la invasion tambien puede ocurrir a traves de tejidos linfoides del tracto respiratorio. Otras posibles rutas de transmision son por ingestion, contacto secual, paso a traves del canal de nacimiento. Los brotes agudos de pasteurelosis puedes ocurrir por la transmision por ectoparasitos y por medio de fomites y moscas P. multocida puede diferenciarse de otras bacterias de la familia Pasteurellaceae Porque produce indol, ornitina descarboxilasa, catalasa y oxidasa; fermenta glucosa, sacarosa y sorbitol. No crece en agar MacConkey, no utiliza citrato ni lactosa: no produce la enzima ureasa, crece mejor a 35-37`C en medios como agar dextrosa almidon (DA) infusion de cerebro corazon (BHI) agar sangre (AS) y agar soya tripticasa (TSA) formando colonias que miden de 1 a 3 mm de diametro despues de 18 a 24 horas de incubacion de apariencia discreta circular, convexa y butirosa.

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