Teis de Maestría

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https://hdl.handle.net/20.500.12371/21039

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Aislamiento y caracterizacion de cepas de Acetobacter diatrophicus de caña de azucar: Purificacion parcial de la nitrogenasa de A.diazotrophicus
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 1998) Pardo Ruiz, Maria Augusta Patricia; Eugenia Baca, Beatriz
Las primeras observaciones sobre interacciones de microorganismos que fijan nitrógeno con plantas no leguminosas, se evidenciaron cuando se aisló Beijerinckia spp en la rizosfera de la caña de azúcar y a Azotobacter paspalii en asociación con Paspalum notatum, (Döbereiner 1961). Una considerable actividad de nitrogenasa, asociada con las raíces de caña de azúcar fue detectada por diferentes autores usando el ensayo de reducción de acetileno (ARA) (Döbereiner et al 1972, Purchase 1980). El primer intento para cuantificar la contribución de la fijación biológica de nitrógeno (FBN) a las plantas fue realizado por Ruschel et al (1975) quienes reportaron una clara incorporación de N15 gaseoso en plantas intactas de 90 días de crecimiento. Sin embargo, sólo hasta que se usaron las técnicas de balance de nitrógeno y dilución de N15, pudo evaluarse la contribución de la FBN en el ciclo de desarrollo de esta planta (Lima et al 1987, Urquiaga et al 1992). Aún antes de que datos exactos cuantificaran la contribución de la FBN en el desarrollo de la caña de azúcar, muchas géneros de bacterias fijadoras de nitrógeno se habían aislado de la rizosfera, raíz, tallos y algunas hojas de la caña de azúcar, dentro de éstas podemos mencionar Beijerinckia, Azospirillum, Azotobacter, Erwinia, Derxia y Enterobacter spp, (Purchase 1980, Dobereiner 1961)) Recientemente se ha aislado una nueva especie de bacteria fijadora de nitrógeno Acetobacter diazotrophicus, que se presenta en gran cantidad en las raíces y tallos de la caña de azúcar (Cavalcante & Döbereiner 1988, Gillis et al 1989). Este diazótrofo, originalmente aislado en medios semisólidos con jugo de caña de azúcar, es un bacilo aerobio Gram negativo, que se desarrolla formando una película en medios semisólidos libres de nitrógeno con 10% de sacarosa, después de 7 a 10 días de desarrollo forma una película delgada en la superficie, este desarrollo mejora cuando la concentración de glucosa y sacarosa es alta (10%). La producción de ácido provoca una disminución del pH hasta 3 o menos, pero su crecimiento y la fijación de nitrógeno continua a este pH por varios días, (Stephan et al 1991). Esta bacteria no posee nitrato reductasa lo cual le permite desarrollarse a altas concentraciones de nitrato, el amonio causa sólo la inhibición parcial de la actividad de la nitrogenasa, especialmente cuando la bacteria se desarrolla en 10% de sacarosa (Texeira et al 1987, Boddey et al 1991), también muestra una alta tolerancia al oxígeno en vida libre, (Reiss et al 1990). La bacteria se ha aislado de muchas variedades de caña de azúcar en diferentes regiones de Brasil, Cuba, Australia y México, (Fuentes Ramírez et al 1992, Li & Macrae 1991). La FBN en todos los microorganismos diazótrofos está mediada por el sistema enzimático de las nitrogenasas, éstas no muestran diferencias importantes cuando se aislan y purifican. Los mecanismos por los cuales se protege este sistema enzimático de la acción del oxígeno, marcan la diferencia de un microorganismo diazótrofo a otro. Las características particulares de la FBN en A. diazotrophicus como son: un metabolismo oxidativo activo, tolerancia de los microorganismos intactos a altas tensiones de oxígeno y continuar la fijación de nitrógeno aún a pH de 2.5 hacen interesante el estudio de la nitrogenasa de este microorganismo y de los mecanismos por los cuales este proceso es resistente a las altas tensiones de oxígeno y los bajos pHs. En el presente trabajo, logramos aislar nueve cepas de A. diazotrophicus a partir de 150 muestras de diferentes cultivos, 135 fueron de caña de azúcar, 12 de maíz y 3 de pasto forrajero. Las nueve cepas fueron aisladas de caña de azúcar, una se aisló de raíz principal y ocho del tallo; éstas se caracterizaron por métodos microscópicos, tintoriales, bioquímicos y fisiológicos, asimismo, se determinó su capacidad de fijación de nitrógeno en presencia y ausencia de nitrato. Lo anterior se realizó con la finalidad de seleccionar, una cepa nativa que fuera buena fijadora de nitrógeno, comparando la actividad específica de nitrogenasa de las cepas nativas y tipo. Se eligió a la cepa tipo PAL5. Esta cepa se eligió debido a que: fue la cepa que mostró mayor actividad específica de enzima en comparación con otras cepas tipo y con las cepas nativas. Con Acetobacter diazotrophicus PAL 5 se realizaron ensayos para determinar las condiciones óptimas de cultivo masivo en un fermentador. Una vez obtenido el cultivo masivo se lisaron las células y se determinaron las condiciones óptimas para la actividad de nitrogenasa en un extracto crudo; a partir de este extracto se realizó la purificación parcial de la enzima, por medio de cromatografía en columna de intercambio iónico, se detectó la presencia de la enzima en las fracciones por medio de anticuerpos policlonales anti Avl y Av2, utilizando la técnica de inmunoelectrotransferencia y por la técnica de ARA. Lográndose detectar una de las fracciones de la enzima. Por último se determinó la actividad de la enzima en cultivos que se desarrollaron en diferentes tensiones de oxígeno, la detección se realizó utilizando las dos técnicas antes mencionadas. Detectando que la enzima presentaba mayor actividad a tensión de oxígeno de un 4% v/v y posteriormente decaía su actividad, lo que concuerda con el comportamiento de otras nitrogenasas que se han purificado de microorganismos aerobios, por la técnica de inmunoelectrotransferencia se logró detectar que a mayor porcentaje de oxígeno en el medio, aumentaba la cantidad de una de las fracciones.
Aislamiento y caracterizacion parcial de cepas silvestres de Bacillus thuringiensis del estado de Puebla
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2002) Navez Gonzalez, Daysi; Vazquez Cruz, Candelario
Bacillus thuringiensis es una bacteria ampliamente distribuida en el medio ambiente, principalmente se encuentra en suelo. Por su actividad bioinsecticida ha sido utilizada para el control biológico de insectos. Produce una protoxina que se acumula en forma de cristal durante la esporulación que mata a insectos de diferentes órdenes en su estado larvario. En el presente trabajo se aislaron 500 cepas de B. thuringiensis de 149 muestras de suelo/humus de diferentes zonas del Estado de Puebla, México. Se observó que la forma predominante de los cristales de las cepas aisladas es redonda o esférica (98.6%), solo un aislado contiene un cristal en forma de barra. La detección de genes mosquitocidas por hibridación ADN-ADN mostró que el gen predominante es el gene cry44a (10.2%). Las cepas aisladas DNG93II, DNG941, DNG95 mostraron homologia con los genes cry4Aa, cry10Aa y cryllAa. Mediante PCR y con uso de oligonucleótidos específicos para estos genes se amplificaron fragmentos de 1579 pb para cry4Aa, 1290 pb para cry10Aa y 1422 pb para cryllAa, estos patrones de amplificación se esperarían en cepas con genotipo semejante a B. thuringiensis subsp israelensis (Bti), como ocurrió en los PCRs de estas tres cepas. También presentan patrones de proteinas muy similar al de B. thuringiensis subsp israelensis y tienen actividad tóxica en larvas de Culex quinquefasciatus y Aedes aegypti. Solo la cepa DNG102III mostró homología con los genes cry10Aa y cryllAa, y por PCR se amplificó un fragmento de 600 pb con oligonucleótidos para cry10Aa. Además, presentó un patrón de proteinas semejante a la de B. thuringiensis subsp jegathesans o B. thuringiensis subsp medellin las cuales son tóxicas a mosquitos. En este estudio encontramos que el 15% de las cepas aisladas presentan genes homólogos a los genes mosquitocidas y solo 0.8% tiene actividad tóxica.
Analisis del papel de los flavonoides en la colinizacion de frijol por Gluconacetobacter diazotrophicus
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2001) Trujillo Lopez, Maria Alejandra; Cano Camacho, Horacio; Trujillo Lopez, Maria Alejandra
La colonización ha mostrado ser un factor importante en el establecimiento de la interacción entre bacterias potencialmente benéficas a plantas. Estudios recientes de bacterias diazotroficas dan importantes contribuciones a extender la FBN a otros tipos de cultivo diferentes a plantas leguminosas. Este tipo de interacciones se establecen en respuesta a múltiples señales reguladoras, de los cuales los flavonoides han mostrado ser señales comunes necesarias para el establecimiento de las interacciones planta- microorganismo. Los flavonoides son liberados por la raiz e influyen en la expresión de genes bacterianos, en la quimiotaxis, en la prevención de la distribución de patógenos, asi como, en la promoción de la colonización. Dado a que nosotros estamos interesados en identificar factores potenciales involucrados en la interacción primaria planta diazótrofo, analizamos la capacidad de Gluconacetobacter diazotrophicus (un endófito de caña de azúcar) a responder a estos metabolitos. Para asegurar la posibilidad de que G diazotrophicus pudiera responder a estos químicos producidos por las raices, nosotros inducimos la producción de flavonoides en las plántulas de frijol común por estrés con luz UV, e infectamos con el diazótrofo. En este trabajo, nosotros reportamos cambios cualitativos y cuantitativos en la adherencia de la bacteria a las raíces de las plántulas tratadas con luz UV, también mostramos resultados de al menos 1 compuesto flavonoide, aislado de las raíces de plántulas de frijol irradiadas con luz UV con un efecto positivo sobre la colonización, además del papel de flavonoides estándares naringenina y daidzeina como inductores de la colonización en este sistema de estudio.
Análisis genético de PerA (BfpT), el regulador transcripcional de los operones bfp y per en Escherichia coli enteropatogena
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Tecpanecatl Xihuitl, José Sergio; Martínez Laguna, Ygnacio; Puente García, José Luis
En Escherichia coli enteropatógena la producción del pilus BFP es dependiente del regulador PerA (BfpT), un activador transcripcional de la familia AraC/XylS. PerA es una proteína de 274 aminoácidos cuyo extremo carboxilo (trecho de 99 aminoácidos), contiene dos dominios a-hélice-vuelta-a-hélice (HTH) similares a los dominios de unión a DNA de algunas proteínas reguladoras. En este estudio se generaron mutantes de PerA (BfpT) en aminoácidos del dominio HTH-2 y fueron analizadas en su capacidad para activar la expresión de fusiones transcripcionales y de unión a DNA. Dos de las mutaciones fueron dirigidas a los residuos Tirosina 255 y Prolina 259 (mutantes PerA-Y255A y PerA-P259A), las cuales afectaron drásticamente la capacidad de PerA de activar la expresión de las fusiones transcripcionales bfpA-cat y perA-cat. Adicionalmente, se obtuvo la mutante PerA-K260Ocre en la cual se introdujo un codón de paro en la posición 260 y una doble mutante con cambios en los residuos Lisina 249 y Tirosina 255. En ambos casos se observó un efecto similar a las mutantes anteriores, remarcando la importancia de estos aminoácidos en la capacidad de PerA de activar a los promotores Ppert y Pbfpt. Posteriormente, las proteínas mutantes PerA-Y255A y PerA-P259A fueron purificadas como proteínas de fusión a MBP y utilizadas en experimentos de interacción proteína-DNA. Nuestros datos indican que el dominio HTH-2 está involucrado en el reconocimiento y la unión a las secuencias reguladoras de los genes blanco, lo cual es concordante con lo determinado para otras proteínas de la misma familia.
Asociacion de algunos factores ambientales con la presencia de anticuerpos anti Mycoplasma penetrans en pancientes con sindrome antifosfolipido
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Herrera Saldivar, Elizabeth; Gil Juarez, Constantino; Cedillo Ramirez, Maria Lilia
El Sindrome Antifosfolipido (SAF) se caracteriza por la presencia de trombosis venosa y lo arterial, pérdidas fetales recurrentes y trombocitopenia, asociadas a niveles elevados de anticuerpos antifosfolipido. Basados en los escasos reportes que asocian la infección por micoplasmas con el SAF, este trabajo intenta determinar la presencia de anticuerpos mediante las técnicas de ELISA y Western blot, asi como la identificación de los factores ambientales que pudieran contribuir al desarrollo o exacerbación de la enfermedad. Durante un año se colectaron muestras de suero y plasma de 88 pacientes del sexo femenino de las cuales 18 fueron de SAF primario, 26 de SAF secundario y 44 de Lupus Eritematoso Sistémico (LES), con un rango de edades comprendida entre los 13 y 64 años. Se detectaron anticuerpos anticardiolipina en 5/18 pacientes con SAF, 5/26 con SAF secundario, 2/44 en LES y 0/44 en el grupo control. El estudio serológico mostró la presencia de anticuerpos tipo IgG dirigidos contra M. penetrans mediante la técnica de ELISA en 8/18 pacientes con SAF, 20/26 pacientes con SAF secundario, 20/44 con LES y 2/44 en el grupo control. Los anticuerpos de tipo IgM determinados por ELISA fueron 14/18 pacientes con SAF, 20/22 pacientes con SAF secundario, 33/44 con LES y 2/44 en el grupo control. Los anticuerpos de tipo IgG detectados por Western blot fueron 13/18, 11/19, 13/24 y 2/44 respectivamente para SAF, SAF secundario, LES y el grupo control. Los anticuerpos de tipo IgM detectados por Western blot fueron 13/18, 13/19, 16/24 y 2/22 respectivamente para cada grupo. No fue posible determinar el papel que juegan los factores ambientales en la etiologia, curso, y exacerbación de la enfermedad debido a que el tamaño de la muestra fue pequeño, por lo que se sugiere para estudios posteriores ampliar el número de muestras Basados en los reportes publicados y en los resultados obtenidos, se sugiere que la presencia de anticuerpos dirigidos contra micoplasmas en la sangre de estas pacientes no fue un evento casual, y que muy probablemente estos microorganismos pudieran jugar un papel importante en el desarrollo de la enfermedad, evento que probablemente sea coadyuvado por algún factor ambiental y predisposición genética del paciente.
Bioindicadores de la contaminacion atmosferica de la cuidad de Puebla: Poblaciones Bacterianas
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2002) Mendoza Hernandez, Jose Carlos; Cedillo Ramirez, Lilia; Muñoz Garcia, Andres
El objetivo de este trabajo fue determinar las poblaciones bacterianas predominantes en la atmósfera de cinco zonas (Norte, Sur, Centro, Sureste, Noreste) de la Ciudad de Puebla, y correlacionarlo con los factores de temperatura y humedad, realizar la identificación de bacterias, determinando su resistencia a antibióticos y a metales pesados, así como la identificación de actinomicetos por microscopía de fuerza atómica. En el aire extramuros e intramuros la mayor carga bacteriana se presentó en la zona Sur. El análisis estadístico ANOVA (Tukey-Kramer) índica que en el aire extramuros existe una diferencia significativa (p<0.01) entre la zona Sur y las otras cuatro zonas, sin embargo en el aire intramuros solo hubo una diferencia significativa (p<0.05) entre la zona Sur y la zona Centro. Para Actinomicetos en el aire extramuros la mayor carga se presentó en la zona Sur, mientras que en el aire intramuros correspondió a la zona Norte. Realizando el análisis estadístico, solamente se encontró diferencia significativa en el aire extramuros (ANOVA Tukey-Kramer, p<0-05) entre la zona Sur y la zona Centro. Los géneros bacterianos Gram Negativos aislados del aire extramuros e intramuros de las cinco zonas de la Ciudad de Puebla, en orden descendente de frecuencia, fueron Enterobacter sp., Enterobacter aerogenes, Pseudomonas fluorescens, Klebsiella oxytoca, Citrobacter sp., Proteus vulgaris, Acinetobacter sp., Proteus mirabilis, Citrobacter freundii, Shigella sp. y Enterobacter cloacae. Para el caso de las bacterias Gram Positivas los géneros correspondieron a: Enterococcus sp, Staphylococcus sp., Staphylococcus saprophyticus., Streptococcus sp. En los géneros bacterianos Gram Negativos la mayor resistencia a antimicrobianos fue a cefalotina, seguida de ampicilina, nitrofurantoína y carbenicilina respectivamente, mientras que en los géneros bacterianos Gram Positivos, la mayor resistencia se presentó para Dicloxacilina, Pefloxacina, Ceftazidima y Eritromicina respectivamente. En cuanto a la resistencia a metales pesados, los metales más tóxicos fueron Hg, Cu, Pb, Ni respectivamente, mientras que los menos tóxicos son Mo, V y Fe tanto para los géneros de bacterias Gram Positivas como Gram Negativas.
Bioindicadores de la contaminacion atmosferica de la cuidad de Puebla: Poblaciones Fungicas
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2002) Merino Guzman, Gloria; Espinoza Texis, Alejandra; Muñoz Garcia, Andres
El objetivo de este trabajo fue determinar en que zona de la ciudad de Puebla (Norte, Noreste, Centro, Sur y Sureste) se encuentra la mayor carga fúngica. Se realizó la identificación de hongos filamentosos y levaduras del género Candida. Los géneros de hongos filamentosos aislados corresponden a Aspergillus sp., Alternaria sp., Penicillium, Stachybotrys sp., Pythium sp., Curvularia sp., Fusarium sp., Ulocladium sp. Mucor sp.. Rhizopus sp., Cladosporium sp. Para el aire extramuros, la zona Norte fue la que presentó una mayor carga de hongos filamentosos con respecto a las otras cuatro zonas, mientras que en el aire intramuros la zona Sur fue la que presentó una mayor cantidad de propágulos. En el aire extramuros, el análisis estadístico realizado ANOVA (Kruskall-Wallis) no presento diferencia significa, mientras que para el aire intramuros se realizó la prueba ANOVA (Tukey-Kramer) sin presentarse tampoco diferencia significativa. A los diferentes géneros de hongos filamentosos aislados se les determinó su resistencia a metales pesados (Hg, Pb, Mn. Ni, Mo, V, Fe, Cu y Zn) a las concentraciones de 10, 25, 50, 100 y 200 ppm. Las especies de hongos levaduriformes aislados corresponden a Candida krusei (80%), Candida albicans (13.3%) y Candida glabrata (6.7%). Para el aire extramuros la zona Sur fue la que presentó mayor cantidad de UFC, además de obtenerse una diferencia significativa (ANOVA Tukey-Kramer, p<0.01) con las otras cuatro zonas, mientras que para el aire intramuros la zona Norte fue la más densamente poblada, obteniéndose una diferencia significativa (ANOVA Kruskall-Wallis, p<0.018). De las levaduras del género Candida, Candida albicans fue resistente a Fluconazol, con una mayor proporción que a Bifonazol, Nistatina y Ketoconazol, y todas fueron sensibles a Anfotericina b. Los metales pesados que fueron más tóxicos para los hongos filamentosos fueron Ni, Hg, Pb, y los menos tóxicos fueron Cu, Zn, Mn, Mo, Fe, V. Los géneros de hongos más resistentes a los nueve metales pesados probados son en orden descendente: Aspergillus sp., Fusarium sp. Stachybotrys sp., Penicillium sp., Ulocladium sp., Alternaria sp., Curvularia sp., Pythium sp., Mucor sp. y Rhizopus sp.
Búsqueda de los productos de expresión de la helicasa tipo RecQ de región subtelomérica en Ustilago maydis
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Vaquero Vera, Araceli; Sánchez Alonso, Patricia G.
Las helicasas RecQ presentan actividad de desenrollamiento de DNA doble en una dirección 3'-5', su actividad catalítica es dependiente de la presencia de ATP, de la concentración de iones Mg+2 y es estimulada por las proteínas de unión a DNA de cadena sencilla (SSB). En diversos organismos, desde bacterias a humanos, se han descrito helicasas homólogas a RecQ, las cuales de manera general participan en recombinación homóloga, (relacionándolas así en procesos de reparación de ruptura de doble cadena), así como en la supresión de recombinación ilegítima. Además recientemente se ha descrito que son capaces de desenrollar estructuras estabilizadas por cuartetos de guanina (4G), involucrándose en la resolución de estructuras aberrantes formadas durante el proceso de replicación. Debido a la homología que presentan y a sus características funcionales semejantes, se conformó una subfamilia denominada Helicasas RecQ. En Ustilago maydis se reportó previamente, un marco de lectura abierto de 2664 pb con homología a helicasas de la subfamilia RecQ, albergada en la región subtelomérica a la cual se le denominó UTASa, la cual es repetitiva, altamente conservada, y se encuentra localizada casi exclusivamente en el extremo de los cromosomas. Estas secuencias asociadas a telómero, forman un mosaico de secuencias moderadamente repetidas que están situadas adyacentes al repetido telomérico en prácticamente todos los organismos. Las secuencias asociadas a telómero parecen no ser esenciales para el mantenimiento del telómero, sin embargo han sido implicados en la propagación del silenciamiento transcripcional, y aislamiento del mismo efecto, como sitio preferido de eventos de recombinación y estabilización de vectores extracromosómicos. En este trabajo, decidimos investigar el papel de la posible helicasa albergada en el elemento UTASa; el primer paso fue buscar la expresión de este marco de lectura abierto (denominado HORF1) por ensayos de RT-PCR. Nuestros resultados indican que el HORF1 se expresa en una cepa con un alto número de repetidos de UTASa, pero no se detectó en una cepa con bajo número de repetidos. Nuestros resultados sugieren un efecto por posición al telómero sobre el gene putativo o defectos estructurales que llevan a la anulación de la expresión en esta cepa por lo que posiblemente no sea necesaria estructural ni funcionalmente. Los ensayos preliminares de sincronización indican que la expresión del HORF1 pudiera llevarse a cabo durante G2/M, lo cual no concuerda con lo reportado por helicasas RecQ, por lo que probablemente no se trata de una verdadera helicasa ReQ.
Busqueda del degradosoma de RNA de Bacillus subtillis
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2002) Cordova Arias, Israel; Vazquez Cruz, Candelario; Olmedo Alvarez, Gabriela
La estabilidad del RNA mensajero (mRNA) es un medio importante por el cual la expresión del gen es controlada. Muchos de los trabajos sobre el recambio del mRNA en bacterias se ha hecho en Escherichia coli, y poco es conocido acerca de su degradación en B. subtilis (Vázquez-Cruz y Olmedo-Alvarez, 1997). Se han hecho importantes avances en los pasados 10 años con la caracterización de elementos en el RNA que actúan en cis y de proteinas celulares que actúan en trans para el control del decaimiento del mRNA. En E. coli se han descrito principalmente cuatro ribonucleasas: dos endonucleasas (RNasa E y RNasa III) y dos exonucleasas (polinucleótido fosforilasa o PNPasa y RNasa II) con actividad 3'->5". Adicionalmente se ha descrito la participación de la poli(A) polimerasa (Grunberg-Manago, 1999). La RNasa E y la PNPasa se encuentran en un complejo multienzimático llamado degradosoma. En este complejo se incluye a la RNasa E, PNPasa, una helicasa dependiente de ATP (RhIB) miembro de la familia DEAD, y la enolasa, que es una enzima glicolitica (Py y cols., 1994). También hay proteínas adicionales asociadas a este complejo como proteinas de choque térmico, las chaperonas GroEL y Dnak, y la polifosfato cinasa, cuyo papel dentro del degradosoma es desconocido. En un estudio hecho en B. subtilis por Bechhofer en 1998 se reportó el primer análisis de la deleción en el gen pnp, que codifica para la PNPasa, indicando que la degradación del mRNA no fue severamente afectada a pesar de que en otros reportes se aseveró que la PNPasa es la principal exoribonucleasa 3'- >5' (Bechhofer y Wang, 1998). En B. subtilis no se conoce un homólogo la RNasa E de E. coli, que además de ser la principal endoribonucleasa, es la proteína que ancia al resto de proteínas del degradosoma. De igual forma, no se conocen otras exonucleasas similares a las más importantes en E. coli. Debido a que hay poca información acerca de los mecanismos coordinados de degradación del RNA en B. subtilis, en principio es necesario identificar los genes de las proteinas que posiblemente participen en la degradación del mRNA, con el fin de tratar de esclarecer si en B. subtilis existe un degradosoma de mRNA similar al de E. coli. Por medio de PCR amplificamos las secuencias de los genes pnp y yqfr que codifican respectivamente para las proteínas PNPasa y la helicasa YqfR de B. subtilis. Esta última es homóloga a la helicasa RhiB de E. Coli (34% de identidad). Las secuencias se clonaron en el vector de expresión pTrcHisA. Ambas secuencias expresaron péptidos de 84 kDa para la proteína PNPasa y de 49.8 kDa para la proteína YqfR. Se secuenció la parte N- terminal de cada una de las proteínas y las secuencias obtenidas de las dos proteínas fueron idénticas a las reportadas en el banco de genes. Purificamos a las 2 proteínas por cromatografía en columnas de níquel y se analizó la interacción de estas proteínas con extractos de B. subtilis crecidos a 30 y 37°C y también bajo un gradiente de glicerol del 10, 20 y 30%. En el análisis de interacción de proteínas PNPasa y YqfR hecho en este trabajo bajo ninguna condición se observó la presencia de alguna otra proteína asociada. De acuerdo con nuestros resultados es posible no exista el degradosoma en B. subtilis como el descrito en E. coli.
Busquedad de bacteriofagos del genero Brucella, a partir de desechos agroindustriales relacionados a la ganaderia
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Muñoz Zurita, Guillermo; Cedillo Ramirez, Lilia; Gil Juarez, Constantino
La contaminación ambiental se puede considerar como la introducción o presencia de sustancias, organismos o formas de energia en ambientes o sustratos a los que no pertenecen y en cantidades superiores a las propias de dichos sustratos por un tiempo suficiente y bajo condiciones tales que interfieren con la salud y la comodidad de las personas, dañando los recursos naturales, o alterando el equilibrio ecológico de la zona (Bell, 1998). La contaminación ambiental es inherente a las actividades del hombre iniciando durante la Revolución Industrial, a fines del siglo XVIII, y acentuändose después de la Segunda Guerra Mundial, cuando aumentan en el mundo el consumo de energia, la producción y uso de diversas sustancias químicas para las cuales los mecanismos naturales de asimilación o degradación han sido rebasados o no existen (Seoanez, 1994). El hombre a diferencia de los demás animales, no se adapta pasivamente a su ambiente, sino que lo adapta a sus necesidades, en este proceso de modificación, los resultados no siempre son benéficos para el hombre. En muchos casos, sus actividades como la construcción y operación de máquinas y otros instrumentos producen cambios que dañan al ambiente en su conjunto (Seoanez, 1999). Los seres vivos están expuestos a la contaminación en todas sus formas, entre ellas la contaminación por residuos radiactivos, desechos industriales desechos de automotores, pesticidas, herbicidas, desechos urbanos sólidos y desechos orgánicos animales y humanos (Stanley, 1994). En los agrosistemas de los paises en desarrollo como México, conviven con los residuos sólidos y líquidos, los tiraderos a cielo abierto y sin control, y los rellenos sanitarios que se ubican lejos de las áreas urbanas y cerca de las tierras de cultivo. Asimismo en los canales, rios, barrancas y caminos vecinales que colindan con parcelas agrícolas, se tiran frecuentemente residuos de manera inadecuada que generan problemas ambientales de los que no hay información precisa sobre la dimensión del fenómeno (SEDESOL, 1994). En México, el 50% de los residuos generados se colocan en sitios no adecuados para su disposición final, creando problemas de contaminación al suelo que los recibe, al agua superficial cuando estos son arrastrados a cuerpos de agua, al agua subterránea cuando se infiltran los contaminantes contenidos en los líquidos provenientes de la descomposición de los residuos, y al aire cuando son quemados sin control (INE, 1998). El problema de agua contaminada fue reconocido por Hipócrates (450 a. C) quien sugería la filtración y ebullición del agua como medidas preventivas. Actualmente David y cols. clasifican a las sustancias que contaminan el agua en ocho categorías: desagües, agentes patógenos, nutrientes, sustancias químicas orgánicas (como los detergentes y los plaguicidas), sustancias químicas inorgánicas, sedimentos, materiales radiactivos y calor (David et al; 2000).
Caracteriación de secuencias involucradas en la secreción de proteasas en Pasteurella multocida
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2005) Juárez Escalante, Miriam; Vázquez Cruz, Candelario; Negrete Abascal, Erasmo
P. multocida es una bacteria gram negativa que infecta a una gran variedad de animales y en algunas ocasiones al humano. Se conocen algunos factores de virulencia de los cuales se vale este microorganismo para ingresar, colonizar e infectar a su hospedero, pero la participación de las proteasas como factor de virulencia no esta claramente establecida. Se han realizado diversos trabajos enfocados en el estudio de las proteasas secretadas por algunos miembros de la familia Pasteurellaceae, pudiendo ser detectados en especies del género Actinobacillus, Haemophilus y Pasteurella. Algunas de estas proteasas secretadas han sido clasificadas como metaloproteasas ya que son inhibidas por EDTA, EGTA y reactivadas por calcio. Así mismo, son capaces de degradar inmunoglobulinas. Una limitante que ha sido detectada para estudio de las proteasas secretadas de P. multocida es que existe una fuerte regulación en la expresión de estas proteasas por parte de la bacteria, que las expresa in vitro únicamente durante las primeras resiembras en el laboratorio, apagando su expresión en posteriores resiembras, lo que dificulta su obtención. Luna Rivero, en el 2003, logro clonar y mantener estable en E. coli la expresión de una proteasa de P. multocida; la caracterización de esta proteasa indicó que se trataba de una metaloproteasa neutra, estable desde 25°C hasta 40°C, y con reactividad cruzada con anticuerpos elaborados contra una proteasa de A. pleuropneumoniae. En este trabajo, se procedió a la clonación de los genes pqqL y lon en un sistema heterologo, mediante técnicas de biología molecular. Los genes clonados se secuenciaron y su actividad proteolitica se analizó en placas con sustrato. Mientras que el análisis de las proteínas secretadas en diferentes etapas de crecimiento de cada una de las clonas se realizó con el uso de zimogramas. Es necesario conocer de manera más clara el papel que desempeñan las proteasas secretadas por P. multocida como factores de virulencia para en un futuro poder desarrollar estrategias terapéuticas en contra de este microorganismo.
Caracterizacion de la respuesta al estrés termico "IN VITRO" y clonacion del gene rpoE de Yersinia pseudotuberculosis
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Suarez Albores, Patricia Guadalupe; Martinez Morales, Javier; Baca Beatriz, E.
Yersinia spp son bacilos Gram negativos, acrobios facultativos, generalmente intracelulares, móviles cuando son aislados del medio ambiente, pero no móviles en el hospedero. El género tiene tres especies de gran importancia médica, debido a que pueden causar enfermedades en humanos, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis y Yersinia pestis, de las cuales esta última es la especie más invasiva, siguiéndole Y pseudotuberculosis y por último Y. enterocolitica (Straley et al., 1993). Las infecciones debidas a Y. enterocolitica y Y. pseudotuberculosis son adquiridas por ingestión de alimentos o agua contaminada. Ambas especies son ubicuas en el medio ambiente; en el humano Y. enterocolitica puede causar varios cuadros clinicos, entre los que tenemos: enteritis, enterocolitis y linfadenitis mesentérica (Bottone, 1997; Noll et al., 1996). Y. pseudotuberculosis es un patógeno que infecta principalmente pájaros y mamíferos causando la enfermedad conocida como pseudotuberculosis; ocasionalmente puede infectar al humano, provocando un cuadro clinico similar al causado por Y. enterocolitica Estas dos especies generalmente causan infecciones auto limitantes. En niños y adultos inmunocomprometidos pueden ocasionar infecciones sistémicas asociadas con endotoxemia (Abigail et al., 1994). Y. pestis, a diferencia de las otras 2 especies, penetra al hospedero por picadura de pulga o por transmisión directa (aerosoles), causando la enfermedad conocida como peste bubónica, o muerte negra (Abigail et al., 1994). Las tres especies presentan tropismo por tejido linfoide, aunque Y. enterocolitica y Y. pseudotuberculosis tienen mayor afinidad por las placas de Peyer's, las cuales se encuentran situadas en el intestino delgado (Abigail et al., 1994; Cheng & Scheewind, 1999). La interacción de Yersinia con células de mamífero, se ha estudiado bioquimica y genéticamente, identificándose asi varios factores involucrados en la adhesión (Yang et al., 1996). Isberg y col. (1988) identificaron en Y. pseudotuberculosis un gene cromosomal, llamado inv (por invasión) que codifica para una proteína de 103 kDa. Esta se localiza en la membrana externa bacteriana y se adhiere a células de mamífero, a través de un receptor de la familia ẞ1-integrina. La síntesis de esta invasina es regulada por temperatura, expresándose mejor a 28 °C (Abigail et al., 1994; Bottone, 1997; Simonet et al., 1992; Yang et al., 1996). Simonet y Falkow (1992) identificaron un gene cromosomal en Y. enterocolitica, llamado ail (attachment-invasion locus), que codifica para una proteína de 17 kDa, la cual permite a la bacteria unirse a cultivos de líneas celulares de mamíferos. Genes homólogos a ail también se encuentran en el cromosoma de Y. pseudotuberculosis y Y. pestis, cuya expresión es regulada por temperatura (37°C) (Bottone, 1997; Simonet & Falkow, 1992). En Y. pestis y Y. pseudotuberculosis se ha caracterizado una adhesina cuya secuencia presenta semejanza a las subunidades del pilus bacteriano. Se conoce como PsaA (pH 6 adhesina) debido a que se expresa mayoritariamente a pH 6. El locus que codifica para esta adhesina ha sido caracterizado en estas dos especies, encontrándose tres genes psaE, psaA, y psaB, de los cuales el producto del segundo gene corresponde a la adhesina correspondiente. En Y. enterocolitica ha sido caracterizada una estructura genética similar al locus psa, la cual se conoce en esta especie como myf (mucoid Yersinia factor). Se sabe que Myf y Psa son similares en cuanto a su regulación y estructura, y es posible que ambas promuevan eventos de adherencia en el hospedero (Abigail et al., 1994; Yang et al., 1996). Otro factor de adherencia determinado en las tres especies, es la proteína Yad/A (Yersinia adherence), la cual es codificada por el plásmido pYV. Esta proteína reconoce en la célula epitelial receptores de la familia ẞ1-integrina. Al igual que la proteína Ail su expresión es regulada a 37 °C (Abigail et al., 1994; Bottone, 1997). En Y. enterocolitica se ha determinado la síntesis de una enterotoxina termoestable conocida como Yst, que está codificada en el cromosoma y presenta propiedades estructurales, fisicoquímicas e inmunológicas similares a la toxina ST de E. coli enterotoxigénica (Mikulskis et al., 1994). La expresión de Yst depende de la fase de crecimiento, temperatura, osmolaridad y pH (Abigail et al., 1994; Mikulskis et al., 1994). Las tres especies patógenas de Yersinia, comparten la presencia de un plásmido de 70-75 kb, el cual es comúnmente conocido como el virulon Yop o plásmido pYV. Este plásmido presenta una serie de genes los cuales codifican para un sistema de secreción tipo III antihospedero, que permite la liberación de proteínas efectoras (conocidas como Yops) en el citoplasma del hospedero (Cornelis et al., 1998) Este plásmido se ha secuenciado completamente en las tres especies, encontrándose aproximadamente 50 genes involucrados en virulencia; un total de 35 genes codifican para la maquinaria de secreción y translocación (Ysc), estos se localizan en una región específica del plásmido, flanqueada en ambos lados por los genes que codifican para las proteínas efectoras Yops (Yersinia outer proteins) y sus chaperonas (Syc). Ensayos realizados in vitro indican que la secreción de las Yops ocurre solamente a 37 °C y en ausencia de calcio. Esta termorregulación esta bajo el control del activador transcripcional VirF (denominado LcrF en Y. pestis y Y. pseudotuberculosis) (Cornelis et al., 1998; Cheng & Scheewind, 1999). Las cepas curadas de este plásmido de virulencia, presentan deficiencia en colonizar el intestino de ratón y no causan infección diseminada (Abigail et al., 1994). Y. pestis tiene 2 plásmidos adicionales que no se encuentran presentes en las otras 2 especies patógenas, uno de 110 kb, y el otro de 9.5 kb (Abigail et al., 1994). El género Yersinia al igual que muchos patógenos microbianos, cuando entran al hospedero se enfrentan a factores estresantes, como son pH, temperatura, fagocitosis, etc. El patógeno, para protegerse de estos factores, activa varios mecanismos de resistencia, uno de los cuales es el aumento en la síntesis de un grupo de proteínas conocidas como proteínas de estrés (Sp), cuando el estrés es térmico, se les conoce como proteínas de choque térmico ("Heat shock proteins", Hsp) o de estrés calórico.
Caracterizacion parcial de una cinasa histidinica de Azospirillum Brasilense
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2012) Villarreal Astorga, Cynthia Teresa; Eugenia Baca, Beatriz
Las rizobacterias promotoras del crecimiento vegetal constituyen un amplio grupo de microorganismos del suelo, las cuales cuando se desarrollan en asociación con un vegetal promueven su crecimiento. Uno de los representantes más estudiados de este grupo es el género Azospirillum debido a que se han realizado numerosas investigaciones tanto en aspectos genéticos y bioquímicos, como de sus aplicaciones tecnológicas (Bashan et. al., 2004). Un paso clave para que las PGPR (Plant Growth Promoting Rhizobacteria) ejerzan efectos de promoción del crecimiento es el logro de una efectiva colonización de las raíces. Este proceso requiere de una serie de mecanismos de señalización descritos en varios modelos bacterianos, y que en Azospirillum están poco estudiados En nuestro grupo de investigación se identificó el gene que codifica para la enzima aromático amino transferasa 1 (AAT1), codificada por el gene hisCl de A. brasilense Sp7 (Guerrero-Castro et. al., 2011). En el plasmido en el que se localizó el gene hisC1, se encontró la secuencia de una ORF parcial (la región N-terminal), que presentaba homologia con una cinasa histidinica (HPAT) Las cinasas histidinicas (HK) son proteinas implicadas en señalización que participan en la transducción de señal de los sistemas de doble componente (TCS). quienes convierten los estimulos del medio ambiente en una señal que induce una respuesta celular a través de modificaciones en la expresión de genes (Stock et. al.. 2000) Los TCS funcionan y transducen las señales del entorno a través de reacciones de fosforilación entre dos componentes conservados, una cinasa histidinica (HK siglas en inglés) y un regulador de respuesta (RR, siglas en inglés). En este trabajo se obtuvo la secuencia completa de la cinasa histidinica. El análisis in silico sugiere que en la proteina presuntamente ocurren los dominios caracteristicos de una cinasa hibrida, la localización en el genoma de A. brasilense Sp245 identificó dos genes putativos, colindantes http://genome.ornl.gov/microbial/abra, que presentan homologia con una presunta MCP (proteina de quimiotaxis de unión a metilo) y CheY Se generó la mutante por inserción de un casete de Te, cuya anotación provisional es A brasilense ABHK Te. La cual se afectó en su capacidad de movilidad. considerablemente, en medio minimo, y retardada en medio completo, en relación con Is cepa silvestre, lo que sugiere que la proteina está involucrada en quimiotaxis.
Caracterizacion por microscopia electronica de barrido de heteroestructuras de GaAs-Ge/GaAs de baja dimensionalidad
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2002) Galeazzi Isasmendi, Reina Galeazzi; Silvia Gonzalez, Rutilo; Gomez Barojas, Estela
En este trabajo se hace un análisis de caracterización por microscopia electrónica de barrido, espectroscopia de energia dispersiva y espectroscopia de electrones Auger de heteroestructuras formadas en su mayoría por 15 capas de GaAs y 15 capas de Ge. alternadas, terminando el crecimiento con una capa de GaAs, las cuales fueron crecidas por la técnica de erosión catódica tipo magnetron. El primer objetivo planteado para la caracterización de estas heteroestructuras fue la medición de los espesores de cada una de las capas que forman las heteroestructuras. Para realizar esta medición fue necesario grabar selectivamente las capas de GaAs para definirlas y asi poder hacer la medición. Esto se hizo mediante el uso de una solución compuesta de NH4OH:H₂O:H₂O en proporción 1:5:25. Al realizar el ataque quimico se determinó la velocidad de grabado del GaAs como 2.5 µm/min, lo que nos permite de acuerdo al espesor nominal reportado para las capas de GaAs aplicar un tiempo óptimo para decaparlas. El decapado nos permitió por un lado medir los espesores de las capas y por el otro hacer un estudio comparativo de la morfologia superficial de las capas de Ge. De este análisis se obtuvo, que conforme aumenta el espesor de las capas de Ge y disminuye el de las capas de GaAs la definición de las capas que forman la heteroestructura mejora, y la morfologia superficial se torna más suave. Para complementar el estudio de las heteroestructuras se realizó el análisis de las mismas mediante la caracterización de la composición elemental de algunas muestras con un sistema de Espectroscopia de Energia Dispersiva de rayos-x (EDS) que nos permitió detectar mediante un mapeo elemental que los tres elementos Ga, As y Ge se encontraban presentes en cada una de las multicapas. Finalmente por medio de perfiles de profundidad AES se comprobó que tanto las capas de GaAs como de Ge no son puras ya que las capas de GaAs contienen una cierta concentración de Ge al igual que las capas de Ge contienen un porcentaje de GaAs.
Caracterizacion por SEM, EDS Y PC de muestras de CdSe crecidas por la tecnica de deposito por baño quimico
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Amador Grajeda, Sergio; Silvia Gonzalez, Rutilo; Gomez Barojas, Estela
Con la invención del transistor, la investigación y el desarrollo tecnológico avanzaron a pasos agigantados en años subsecuentes, especialmente en las áreas de dispositivos optoelectrónicos. Las industrias así como los centros de investigación se vieron en la necesidad de desarrollar dispositivos con mejores características, lo cual provocó una tendencia al desarrollo de tecnologías más baratas, más pequeñas y de mejor calidad. En la actualidad existe un gran interés por estudiar materiales que ofrezcan mejores propiedades. Los compuestos semiconductores que tienen mayor auge en la actualidad son los que pertenecen a los grupos III-V y II-VI de la tabla periódica. El selenuro de cadmio (CdSe) pertenece al grupo II-VI y se caracteriza por tener una banda de energia prohibida (Eg) de 1.70 eV a temperatura ambiente [1, 2] y alta fotosensibilidad en el intervalo visible del espectro solar. Este material es importante debido a su aplicación para la fabricación de transductores ultrasónicos [3], fotorresistores, capas luminiscentes [4], diodos de heterounión [5], láseres [6] y celdas solares. Otra aplicación la tiene en la fabricación de transistores por efecto de campo (FETs) en sustratos de vidrio debido a la innovación de los displays planos de cristal líquido [7], éstos normalmente se fabrican con Si amorfo o policristalino. Sin embargo, las ventajas que presenta el CdSe sobre el Si en la fabricación de transistores de capa delgada son una menor temperatura de proceso y una mayor movilidad de sus portadores de carga. La investigación de este material es un tema de actualidad debido a que su densidad y movilidad de portadores de carga son dificiles de obtener predeterminadamente, ya que son sensibles a la variación en estequiometría y a la concentración de impurezas. Por otro lado, une de los proyectos de investigación pionero en el Instituto de Fisica, UAP (IFUAP) ha sido la sintesis del compuesto binario CdS por CBD asi como su caracterización por las técnicas disponibles en este instituto en los tiempos correspondientes [811]. El CdSe es otro compuesto binario II-VI que se ha estado estudiando en el IFUAP. Principalmente, el estudio de la sintesis por CBD de este compuesto se realizó en trabajos anteriores [12, 131. Un estudio detallado de caracterización de este material se realiza en el presente trabajo con el objetivo de llegar a elucidar la influencia de los parámetros de depósito, principalmente del volumen de CdCl, para valores pequeños sobre la razón atómica Cd/Se, asi como también para diferentes tiempos de depósito y observar su influencia sobre la morfología, composición elemental, las propiedades ópticas y eléctricas. Para este análisis se cuenta con un conjunto disponible de películas de CdSe depositadas sobre sustratos de vidrio (corning 2947). Con este propósito se emplean las técnicas: microscopia electrónica de barrido (SEM), espectroscopía en energia dispersiva de rayos-x (EDS) y fotocorriente (PC). Cabe mencionar que los resultados aqui obtenidos se han considerado para mejorar y realizar un estudio más sistemático en cuanto al control de cada uno de los parámetros de depósito para optimizar las caracteristicas deseadas del material, mediante una tesis doctoral, la cual está en proceso. Para poder conocer las propiedades morfológicas, de composición, eléctricas y fotoeléctricas de las películas se hace uso de técnicas de caracterización complementarias con el objeto de obtener información acerca de las características del material en estudio. Un factor importante que se busca cuando se emplean técnicas de caracterización es que éstas no alteren las propiedades intrinsecas del material, o en su defecto que el cambio sea minimo. De aquí que estas técnicas se pueden clasificar como: destructivas y no destructivas. Las técnicas que se van a emplear para el desarrollo del presente trabajo se consideran no destructivas y son: la microscopía electrónica de barrido (SEM), la espectroscopía en energía dispersiva de rayos-x (EDS), y la fotocorriente (PC). Mediante la técnica SEM se estudia la morfología superficial de las películas bajo estudio, así como los defectos superficiales de las mismas. Por EDS se realiza un estudio cualitativo y semi-cuantitativo de los elementos que conforman la película así como la distribución de los mismos a través de un mapeo de rayos-x. La técnica de PC proporciona información sobre la respuesta espectral del material mediante la excitación con fotones, es decir, se puede observar si existen niveles de impurezas o defectos dentro de la película que puedan afectar las características del mismo. Cabe mencionar que la técnica CBD es sencilla de implementar y es de bajo costo; principalmente tiene la particularidad de que se pueden controlar externamente los parámetros de depósito en el baño de reacción. Las muestras que se tienen disponibles para este estudio se crecieron con diferentes parámetros de depósito a saber: el volumen de cloruro de cadmio en la solución de depósito (Vcacı₂ = 1, 3, 6, 7, 9 y 12 ml), el tiempo de depósito (ta= 30, 60 y 90 min) y la temperatura inicial (T;= 42 y 45 °C). En el capítulo 1 de este texto, se describen a groso modo los fundamentos de las técnicas de caracterización que se emplean en el desarrollo del presente trabajo. En el capítulo 2 se describen las características de depósito de las películas de CdSe que se estudian, los procedimientos de caracterización por las diferentes técnicas empleadas: SEM, EDS y PC, y se presentan los resultados obtenidos experimentalmente y su discusión, y finalmente se presentan las conclusiones de este trabajo.
Clonacion del gen y caracterizacion parcial de una proteasa de Pasteurella multocida
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Luna Rivero, Maria Juana Norma; Vazquez Cruz, Candelario; Negrete Abascal, Erasmo
Pasteurella multocida es un bacilo gram negativo, aerobico facultativo capsulado, no movil que no forma esporas, de amplia distribucion en todo el mundo. Forma parte de la flora normal de nasofaringe tracto gastrointestinal y genital de muchos animales domesticos y salvajes. Esta bacteria pertenece a la familia Pasteurellaceae, en las que tambien se encuentran otros generos como Haemophilus y Actinobacillus. P. multocida ha sido extensamente estudiada desde que aislo por primera vez a finales de 1870 En epocas recientes la aplicación de nuevas tecnologias ha ampliado el conocimiento del microorganismo y su epidemiologia. Sin embargo algunos de los mecanismos moleculares que participan en la infeccion y virulencia de P. multocida aun son desconocidos y este organismo continua causando un amplio rango de enfermedades en aniamles y humanos. P multocida es el agente causal del colera de las aves, septicemia hemorragica en ganado vacuno, rinitis atrofica y neumonia en cerdos y la mas comun fuente de infeccion de tejidos en humano debido a mordeduras de perros y gatos. Con menor frecuencia la bacteria se ha asociado con infecciones que afectan diferentes organos o sistemas del ser humano, por ejemplo se descubrio un caso de meningitis causada por P. multocida al practicar la autopsia de un hombre de 52 años. La bacteria se transmite de animal a animal principalmente por via aerea a traves de aerosoles. Se cree que la invasion tambien puede ocurrir a traves de tejidos linfoides del tracto respiratorio. Otras posibles rutas de transmision son por ingestion, contacto secual, paso a traves del canal de nacimiento. Los brotes agudos de pasteurelosis puedes ocurrir por la transmision por ectoparasitos y por medio de fomites y moscas P. multocida puede diferenciarse de otras bacterias de la familia Pasteurellaceae Porque produce indol, ornitina descarboxilasa, catalasa y oxidasa; fermenta glucosa, sacarosa y sorbitol. No crece en agar MacConkey, no utiliza citrato ni lactosa: no produce la enzima ureasa, crece mejor a 35-37`C en medios como agar dextrosa almidon (DA) infusion de cerebro corazon (BHI) agar sangre (AS) y agar soya tripticasa (TSA) formando colonias que miden de 1 a 3 mm de diametro despues de 18 a 24 horas de incubacion de apariencia discreta circular, convexa y butirosa.
Clonación y secuenciación de componentes de un presunto transportador para el fierro, tipo ABC de Gluconacetobacter diazotrophicus
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Sánchez Espíndola, Adriana; E. Baca, Beatriz
En la búsqueda de genes que codifican para el complejo oxidasa terminal a, de Gluconacetobacter diazotrophicus, se realizó un escrutinio de un minibanco construido en el plásmido pSUP202 donde, se clonaron fragmentos del genoma de G. diazotrophicus obtenidos por digestión con EcoRI; empleando como sonda una región de 400 pb obtenida por reacción de PCR; de este estudio se obtuvieron dos clonas, se procedió a la purificación de estos dos plásmidos recombinantes, los cuales contienen insertos de una longitud de 5.4 y 3.1 Kb (nombrados pAD001 y pAD002, respectivamente). La determinación del mapa de restricción de pAD001 indicó la presencia de sitios de restricción, que sirvieron para subclonar y obtener los plásmidos pAD191 y pAD131, de 1.9 kb y 1.3 kb respectivamente. Se determinó la secuencia de nucleótidos de ambos plásmidos. El análisis de la secuencia de pAD191 mostró dos fases de lectura abierta, denominados ORF1 (192 aminoácidos) y ORF2 (secuencia parcial de 64 aminoácidos). El análisis BLASTP indicó la siguiente homología: identidad de 41% y 54% de similitud del ORF 1 con una PBP (por sus siglas en inglés, Periplasmic binding protein); e identidad de 55% y 75% de similitud para el ORF 2 con una proteína integral de membrana, denominada dominio transmembranal TMD; cuyos productos de traducción indican la presencia de presuntas proteínas componentes de un sistema putativo de transporte de hierro (Fe) tipo ABC. Aunque los porcentajes identidad/similitud del ORF 1 son significativos, solo se obtuvo una secuencia parcial (correspondiente al presunto extremo carboxilo terminal ), por lo que estudios adicionales son requeridos. La homología más significativa del ORF2 concierne a una proteína de Zymomonas mobilis. Alineamientos adicionales tipo CLUSTALW indicaron que, aunque en menor grado esta presunta proteína también muestra homología significativa con otras proteínas integrales de membrana y componentes de un sistema de transporte para el Fe, de otras bacterias. La secuencia obtenida de pAD131 mostró también dos fases de lectura abierta (ORF2 con 279 aminoácidos y ORF3 con 285 aminoácidos); mediante el análisis BLASTP se identificó homología (identidad 44% y similitud 61%) del ORF 2 con el extremo carboxilo terminal de la proteína integral de membrana putativa de Z. mobilis, cuya región amino terminal se encuentra contenida en el ORF2 de pAD191. El ORF2 está constituido de 343 aminoácidos, con un peso molecular de 34,417 Da y un pl teórico de 9.2. La ORF3 reveló una identidad de 55% y similitud de 68% con el componente de unión a ATP, los cuatro motivos característicos de estas proteínas fueron localizados en la secuencia, que contiene 286 amino ácidos y un peso molecular estimado de 30,318 Da y un pl teórico de 11.3. En el presente estudio se identificaron 3 fases de lectura abierta (ORFs) que presuntamente codifiquen para componentes de un sistema de transporte tipo ABC para Fe en G. diazotrophicus. Los datos obtenidos indican que en el plásmido pAD001 ocurren genes ortólogos de un sistema de transporte tipo ABC para Fe descritos en Escherichia coli, Haemophilus influenzae, y la cianobacteria Synechocystis sp, cuya organización es sugerente de un operón. Con el fin de iniciar la caracterización de este sistema de transporte tipo ABC se obtuvo una mutante por reemplazo alélico con un cartucho de resistencia al antibiótico kanamicina, la mutante se analizó por hibridación DNA/DNA y amplificación, para corroborar la inserción del cartucho.
Comparación de los efectos de una enseñanza tradicional y una no tradicional en la persistencia de las concepciones intuitivas de los alumnos sobre corriente eléctrica
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Suárez Aca, Oliva; Brito Orta, Raúl A.; Corona Cruz, Adrián/Fuchs Gómez, Leticia
En este trabajo se reportan las preconcepciones (o ideas previas) relacionadas con el concepto de corriente eléctrica que tienen los estudiantes del nivel medio superior de dos escuelas preparatorias de la BUAP en México, en particular, del Estado de Puebla, también se haya el resultado de la comparación realizada entre las ideas de estos estudiantes con las de estudiantes de otros países. Además, mediante un estudio exploratorio de carácter descriptivo, intentamos encontrar el grado de persistencia de las preconcepciones de los alumnos después de ser sometidos a diferentes metodologías de enseñanza, una tradicional y otra no-tradicional. Para ello y retomando la investigación bibliográfica realizada, primero elaboramos las secuencias didácticas, una que cumpliese las características de la labor docente desde la perspectiva tradicional y otra con las características de la labor docente desde la perspectiva no-tradicional, a la par elaboramos un cuestionario (al que llamamos instrumento de evaluación), ya teniendo las dos secuencias didácticas y el instrumento de evaluación, se aplicó el instrumento de evaluación antes de la enseñanza del concepto de corriente eléctrica, después se pusieron en práctica las secuencias didácticas, y por último se volvió a aplicar el instrumento de evaluación. Posteriormente se retomaron las respuestas emitidas por lo alumnos para realizar el estudio de carácter exploratorio, descriptivo y correlacional, y comparar el impacto de las secuencias didácticas a través del cambio conceptual logrado en los alumnos de las escuelas preparatorias "Enrique Cabrera Barroso" de Tecamachalco y "Lic. Benito Juárez García" ambas de la BUAP. De él, se concluyó que las ideas previas relacionadas con el concepto de corriente eléctrica de los alumnos de la BUAP, son semejantes a las ideas de alumnos del mismo nivel académico de otros países, también que estas ideas previas persisten después de la enseñanza de este concepto sin importar la metodología de enseñanza seguida durante sus cursos, además también nos muestra que existe diferencia en la conceptualización de los alumnos relacionada con este concepto, y que depende de la metodología de enseñanza, lo que nos permite sugerir una metodología de enseñanza más apropiada para enseñar física a los estudiantes del nivel medio superior.
Crecimiento y caracterizacion de peliculas delgadas de CdS obtenidas por el metodo de deposicion en baño quimico
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 1999) Rivera Flores, Bertha Luisa; Gracia Jimenez, Justo Miguel
Los compuestos semiconductores II-VI tienen una gran importancia tecnológica por sus aplicaciones en la fabricación de dispositivos optoelectrónicos. Debido a esto, es necesario obtener estos materiales con propiedades físicas y químicas de alta calidad. Así, estos compuestos se pueden obtener en forma de películas delgadas por una gran cantidad de técnicas como son evaporación por dispersión al vacio, electrodeposición, pirólisis y deposición en baño químico entre otras. De esta manera, se obtienen semiconductores los cuales presentan una gran variedad tanto en el grado de cristalinidad como en la calidad óptica. El método por deposición en baño químico (DBQ), es una técnica relativamente sencilla, ya que sólo requiere del control de las concentraciones de los materiales, la temperatura y el pH en el baño de reacción. Esta técnica permite obtener peliculas delgadas policristalinas de compuestos semiconductores de los grupos II y VI de la tabla periódica. En el presente trabajo, se crecieron películas delgadas del material sulfuro de cadmio (CdS), por la tecnica de DBQ Este semiconductor posee una banda prohibida de 2.4 (eV) a temperatura ambiente, y puede cristalizar en la forma cúbica y hexagonal. El poseer este ancho de banda prohibida lo perfila como un buen candidato para ser material base en la fabricación de dispositivos optoelectrónicos, celdas solares, láseres o transistores de película delgada. Como una continuación al trabajo de caracterización del CdS crecido por la técnica de DBQ que realiza el IFUAP, y con el fin de dar respuesta a algunas interrogantes, nace la motivación de este trabajo, mediante el cual se plantea realizar un estudio sistemático del efecto que tiene la variación de la relación Cd/S sobre la morfologia, composición química de la película delgada, la transmitancia, la fotoconductividad y la fotoluminiscencia de este material semiconductor. Para la caracterización de este material semiconductor se utilizaron técnicas de análisis no destructivas, como son la microscopía electrónica de barrido (SEM), la espectroscopía de energia dispersada (EDS), la fotoconductividad, la transmitancia, así como la fotoluminiscencia. El orden que sigue este trabajo es el siguiente: En el Capítulo 1, se presenta una introducción sobre la importancia de los semiconductores formados por los grupos II y VI de la Tabla Periódica de los Elementos, y en particular la del CdS, así como sus aplicaciones tecnológicas y la técnica de crecimiento. Se presenta además, una descripción de los principios Básicos de las técnicas de caracterización. En el Capítulo 2, se describe el dispositivo experimental utilizado para el crecimiento de estas películas, así también, los dispositivos experimentales utilizados en las diferentes técnicas de caracterización de estas peliculas, y los resultados experimentales obtenidos en ellos. Finalmente, en el capítulo 3, se presenta la discusión de los resultados experimentales obtenidos, y se dan algunas conclusiones.
Crecimiento y caracterizacion del compuesto InGaAsSb por EFL
(Benemérita Universidad Autónoma de Puebla, 2003) Olvera Cervantes, Javier; Olvera Hernandez, Javier; Rojas Lopez, Marlon
En esta tesis hacemos un estudio del crecimiento y caracterización de capas epitaxiales de InGaAsSb obtenidas por la técnica de Epitaxia en Fase Liquida (EFL). Para tal efecto se hace un estudio Teórico-Experimental. En la parte teórica se efectúa una revisión del equilibrio sólido-liquido para soluciones sólidas cuaternarias que involucran compuestos semiconductores en la aproximación de la solución regular, para calcular las fracciones atómicas de las componentes elementales en la fase líquida. Estos resultados se usan en la parte experimental para formar la solución líquida a una temperatura de 540°C. A las capas crecidas se les hizo estudios de Difracción de Rayos X de alta resolución y microscopía Raman con el objeto de observar el empate de red y modos vibracionales de la red. En cuanto a morfología superficial, las capas obtenidas fueron lisas, planas y de aspecto como espejo.

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